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《草莓果實(shí)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、第29卷第2期北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)V01．29，NO．22014年4月JOURNALOFBEIJINGUNIVERSITYOFAGRICULTUREApr．，2014草莓果實(shí)cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及鑒定張少會(huì)，沈元月(北京市農(nóng)業(yè)應(yīng)用新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京農(nóng)學(xué)院植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京102206)摘要：草莓是研究果實(shí)發(fā)育的模式植物。基因表達(dá)譜分析已成為目前分子生物學(xué)領(lǐng)域重要的研究方向。草莓cDNA文庫(kù)構(gòu)建是研究果實(shí)發(fā)育基因表達(dá)的基礎(chǔ)工作。本研究從草莓白果中提取高質(zhì)量的總RNA，通過(guò)MMIV反轉(zhuǎn)錄酶的作用，把RNA中的mRNA反轉(zhuǎn)成cD
2、NA第一鏈，再利用特異引物通過(guò)LD-PCR擴(kuò)增合成雙鏈cDNA。將純化帶有黏性末端的雙鏈cDNA與kTripIEx2載體進(jìn)行連接，最后對(duì)重組載體進(jìn)行E．coliXI1一Blue體外包埋為cDNA原始文庫(kù)。經(jīng)過(guò)鑒定，原始文庫(kù)的滴度為1．13×10～cfu／mL，重組率為100，插入片段多分布在0．2-2．0kb之間，表明構(gòu)建的草莓果實(shí)cDNA文庫(kù)質(zhì)量較高，能夠滿足后續(xù)的分子生物學(xué)研究工作的需要，同時(shí)也為其他果樹(shù)相關(guān)研究提供借鑒。關(guān)鍵詞：草莓果實(shí)；RNA提??；cDNA文庫(kù)中圖分類號(hào)：$668．4網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：／／ww
3、w．cnki．net／kcms／detail／】】．2156．S．20140507．2042．062．html文章編號(hào)：1002—3186(2014)02—0012·O3文獻(xiàn)標(biāo)志碼：Adoi：10．13473／j．cnki．issn．1002—3186．2014．0052ConstructionofacDNAlibraryofstraberryfruitZHANGShaohui，SHENYuanyue(BeijingKeyLabofNew—techinAgricultureApplication，BeijingUniver
4、sityofAgriculture，Beijing102206，China)Abstract：Strawherryisamodelplantforfruitdevelopmentresearch．Geneexpressionprofilingisanimportantresearchfieldofmolecularbiology．Thus，constructionofcDNA1ibrary1aysfoundationonstudyingfruitdevelopment—relatedgeneexpressioninstra
5、wberry．Inthisstudy，totalRNAwasisolatedfromfruitsofstrawberrywhitefruitstage，singlestrandcDNAwassyn—thesizedbasedontheextractedmRNAsoftotalRNAusingMMIVreversetranscriptase．a(chǎn)nddoublestrandcDNAsweresyn—thesizedusingPCR，thendoublestrandcDNAswerepurifiedandpackagedbyth
6、ephagepackagingsystemandligatedtothebluntedTripEx2vector，finallytransformedintotherecombinantvectorofE．coliXL1一Blue．Theresultsshowedthatthecon—structedcDNAlibraryiSofthetiterof1．13×lOcfu／m1，theinsertsizesiSbetween0．2～2kh，andrecombinationrateofthecDNAlibraryreached
7、i00，indicatingthatahighercDNAlibraryofstrawberryfruitisconstructed，whichmeetstheneedsofsubsequentmolecularbiologyresearch，meanwhileprovidesafoundationforotherfruittreerelatedstudies．Keywords：strawberryfruit；RNAextract；cDNAlibrary近年來(lái)，隨著基因大規(guī)模、高通量測(cè)序的實(shí)現(xiàn)，基因表達(dá)莓果實(shí)發(fā)育特殊的白果
8、期果實(shí)為試驗(yàn)材料，在提取分離高質(zhì)譜分析在挖掘新基因及基因新功能方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)，目量RNA的基礎(chǔ)上，通過(guò)反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增、載體連接、體外前已成為分子生物學(xué)領(lǐng)域重要的研究方向。cDNA文庫(kù)代包埋等一系列cDNA文庫(kù)構(gòu)建的操作，成功構(gòu)建草莓果實(shí)高表mRNA的反轉(zhuǎn)錄復(fù)本，從中可以分離各種cDNA，在研究質(zhì)
