實驗二 細菌革蘭氏染色.ppt

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1、實驗二細菌革蘭氏染色一、實驗目的學習微生物制片、染色的基本技術(shù)掌握細菌革蘭氏染色及無菌操作技術(shù)進一步觀察細菌的基本形態(tài)C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細菌的染色方法。二、實驗原理革蘭氏染色1、用堿性染料結(jié)晶紫對菌液涂片進行初染2、用碘溶液進行媒染，其作用是提高染料和細胞間的相互作用從而使二者結(jié)合得更牢固。3、用乙醇或丙酮沖洗進行脫色。在經(jīng)歷脫色后仍將結(jié)晶紫保留在細胞內(nèi)的為革蘭氏陽性細菌，而革蘭氏陰性細菌的結(jié)晶紫被洗掉，細胞呈無色。4、用一種與結(jié)晶紫具有不同顏色的堿性染料對涂片進行復染。例如沙黃，它使原來無色的革蘭氏陰性細菌最后呈現(xiàn)桃紅到紅色，而革蘭氏陽性細菌繼續(xù)保

2、持深紫色三、實驗材料1、菌種：大腸桿菌（E.C）、枯草桿菌（B.S）2、染料：結(jié)晶紫、復紅、碘液等3、材料：95%酒精等4、標本片：芽孢、莢膜、孢子絲涂片—風干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—脫色—水洗—復染—水洗—干燥—鏡檢四、實驗方法（一）革蘭氏染色菌懸液涂片干燥滴加無菌水固定取菌苔涂片SmearpreparationHeatfixingcrystalvioletstainwashwithwaterStainingCounterstainwithSafranin注意事項：（1）在涂片時不可過厚，否則在染色脫色時，都不易均勻，固定時，不可過熱，以載玻片不燙手為宜。（2）嚴格掌握脫色程度，

3、是革蘭氏染色的關(guān)鍵步驟。如脫色時間太長，陽性菌會誤為革蘭氏陰性菌，時間不足，革蘭氏陰性菌會誤為革蘭氏陽性菌。（3）在鏡檢時，以分散開的菌體的革蘭氏染色反應為準。（4）設定陰性和陽性對照，確保實驗的可靠性。（二）觀察細菌的特殊結(jié)構(gòu)1、莢膜2、芽孢3、孢子絲五、思考題1、講述革蘭氏染色的原理，并指出E.C和B.S分別屬于革蘭氏陽性或陰性？2、繪圖表示三種細菌的特殊結(jié)構(gòu)。3、做革蘭氏染色涂片為什么不能過于濃厚？革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵一步是什么？4、當對未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能證明你的染色技術(shù)和結(jié)果的正確性？