實(shí)驗(yàn)2 線粒體和液泡系地超活染色與觀察.doc

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1、中國(guó)海洋大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告：常天易系年級(jí)：海洋生命學(xué)院2012級(jí)專業(yè)：生物科學(xué)科目：分子細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)號(hào)：線粒體與液泡系的超活染色與觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布；2、學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)。3、觀察豆芽根部細(xì)胞的液泡分布二、實(shí)驗(yàn)原理　?。薄⒄布{斯綠B染液被線粒體中的細(xì)胞色素氧化酶氧化而呈現(xiàn)藍(lán)綠色，在細(xì)胞的其他部位因保持還原狀態(tài)而呈現(xiàn)無(wú)色。２、中性紅染液為一種堿性染液，易隨外周染液進(jìn)入液泡，因液泡環(huán)境偏酸性，所以使液泡被染上紅色。三、實(shí)驗(yàn)材料黃豆幼根根尖、人口腔上皮細(xì)胞，Ringer試劑，詹納斯綠B染色液，中性紅染液四、實(shí)驗(yàn)方法黃

2、豆幼根根尖的超活染色（1）、使用中性紅染液將黃豆幼根根尖小心地縱切一薄片將縱切片浸入到載玻片上的中性紅染液中染色１０分鐘用吸水紙輕輕地把染液吸掉，再向標(biāo)本中滴加Ringer試液蓋上蓋玻片，用鑷子輕壓玻片后，在顯微鏡下觀察（２）、使用詹納斯綠B染液將黃豆幼根根尖小心地縱切一薄片將縱切片浸入到載玻片上的詹納斯綠B染液中染色10分鐘蓋上蓋玻片，用鑷子輕壓玻片后，在顯微鏡下觀察（３）、使用詹納斯綠B和中性紅染液混合染色①先加詹納斯綠B，后加中性紅染液將黃豆幼根根尖小心地縱切一薄片將縱切片浸入到載玻片上的詹納斯綠B染液中染色10分鐘向載玻片上的標(biāo)本滴加中性紅染液再染色１０分鐘用吸水

3、紙輕輕地把染液吸掉，再向標(biāo)本中滴加Ringer試液蓋上蓋玻片，用鑷子輕壓玻片后，在顯微鏡下觀察②、使用詹納斯綠B和中性紅染液同時(shí)染色將黃豆幼根根尖小心地縱切一薄片將縱切片浸入到載玻片上的詹納斯綠B染液和中性紅染液的混合物中染色10分鐘用吸水紙輕輕地把染液吸掉，再向標(biāo)本中滴加Ringer試液蓋上蓋玻片，用鑷子輕壓玻片后，在顯微鏡下觀察人口腔上皮細(xì)胞的超活染色（1）、使用詹納斯綠B染色用消毒牙簽的鈍端在口腔上皮輕輕地掛取部分上皮細(xì)胞在載玻片上滴加詹納斯綠Ｂ染液，將牙簽上的容物在染液中混勻染色10分鐘后，在顯微鏡下觀察（２）、使用中性紅染色用消毒牙簽的鈍端在口腔上皮輕輕地掛取部

4、分上皮細(xì)胞在載玻片上滴加中性紅染液，將牙簽上的容物在染液中混勻，染色10分鐘用吸水紙輕輕地把染液吸掉，再向標(biāo)本中滴加Ringer試液蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、觀察根尖的染況圖1、根部伸長(zhǎng)區(qū)的切片及其在中性紅染色下顯示的液泡。圖2、根部成熟區(qū)的切片及其在中性紅染色下顯示的液泡。圖3、根部成熟區(qū)用詹納斯綠B染色，藍(lán)色部位為線粒體，圖中液泡因染色較淺而呈現(xiàn)。圖4、根部用詹納斯綠和中性紅染液染色，兩種試劑同時(shí)加入。圖5、根部先用詹納斯綠B染色，后用中性紅染色，所示液泡。2、觀察口腔上皮細(xì)胞的染況圖6、口腔上皮細(xì)胞用詹納斯綠B染色，藍(lán)色部位為線粒體。圖7、口腔上皮細(xì)

5、胞用中性紅染色，圖中褶皺（箭頭所指）為高爾基體。六、思考題1.用一種活體染色劑對(duì)細(xì)胞進(jìn)行超活染色，為什么不能同時(shí)觀察到線粒體、液泡系等多種細(xì)胞器？因?yàn)檎布{斯綠B染液是通過(guò)被細(xì)胞色素氧化酶氧化而顯藍(lán)色的；中性紅染液時(shí)通過(guò)植物的活細(xì)胞大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)，因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽(yáng)離子而呈現(xiàn)紅色，而進(jìn)行染色的；染色機(jī)制不同，所以無(wú)法同時(shí)染色。但是實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在詹納斯綠B染液染色時(shí)，在適當(dāng)?shù)娜疽簼舛葒m當(dāng)?shù)娜旧珪r(shí)間里，在合適的細(xì)胞（代較為旺盛，線粒體較多）里，詹納斯綠B染液可以把線粒體染色，而液泡由于染色程度較淺而顯現(xiàn)。2、黃豆

6、根尖經(jīng)中性紅超活染色，為什么看到生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞中液泡多，而且染色深，延長(zhǎng)區(qū)細(xì)胞中液泡數(shù)量變少，染色淺？在生長(zhǎng)點(diǎn)的細(xì)胞，由于分裂很快，所以細(xì)胞小、細(xì)胞質(zhì)濃、細(xì)胞核大、代旺、液泡多、液泡小，細(xì)胞的代較快，所以液泡酸性較強(qiáng)，所以染色液較深；而在延長(zhǎng)區(qū)的細(xì)胞，由于分裂較慢，以延長(zhǎng)為主，所以細(xì)胞的液泡個(gè)數(shù)較少、而液泡較大，細(xì)胞的代較為緩慢，所以液泡的酸性較弱，所以染色較淺。七、總結(jié)與討論1、通過(guò)對(duì)圖1至圖2的對(duì)比，通過(guò)對(duì)根不同部位在光鏡下的觀察，發(fā)現(xiàn)：液泡在分生區(qū)較小，數(shù)目較少，染色較淺，再向成熟區(qū)的過(guò)渡中，液泡數(shù)目變多，并逐漸有融合之勢(shì)，染色液逐漸加深。　　2、在通過(guò)詹納斯綠B對(duì)根

7、部的染色發(fā)現(xiàn)，僅十分鐘，詹納斯綠B只能將表皮附近的細(xì)胞染上顏色，這可能是由于植物細(xì)胞的細(xì)胞壁的阻攔。對(duì)被染上色的細(xì)胞進(jìn)行觀察后發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞質(zhì)中線粒體被染成了藍(lán)色，液泡亦被染上顏色，但顏色相對(duì)較淺（圖3），所以可以看見(jiàn)液泡?！　?、中性紅和詹納斯綠B染液都對(duì)黃豆根部細(xì)胞染色時(shí)，詹納斯綠B會(huì)覆蓋中性紅染液的顏色，而導(dǎo)致觀察結(jié)果模糊?！　?、用中性紅染液對(duì)口腔上皮細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)發(fā)現(xiàn)，可以較為清晰的看到細(xì)胞的高爾基體結(jié)構(gòu)。