實(shí)驗(yàn)五線粒體和液泡系的超活染色與觀察

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1、實(shí)驗(yàn)五線粒體和液泡系的超活染色與觀察杭州師范大學(xué)劉姬艷一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察動(dòng)、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體、液泡系的形態(tài)、數(shù)量與分布；2.學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器的超活染色技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理活體染色是應(yīng)用無(wú)毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染。體外活染又稱(chēng)超活染色，它是由活的動(dòng)植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。所用的染料一般為堿性染料。因?yàn)樗哂腥芙庠陬?lèi)脂質(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性，易于被細(xì)胞吸收。詹納斯綠

2、(JanusgreenB)和中性紅(neutralred)是常用的堿性染料。詹納斯綠Ｂ可專(zhuān)一性地對(duì)對(duì)線粒體進(jìn)行活染,這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài)),呈藍(lán)綠色。中性紅對(duì)液泡系的染色具有專(zhuān)一性，將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色。三、實(shí)驗(yàn)用品1.器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋、、剪刀、鑷子、解剖刀、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙2.試劑：Ringer液、1/5000詹納斯綠Ｂ、1/3000中性紅3.材料：洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞、小麥幼根根尖稱(chēng)取50mg詹納斯綠B溶于5mlRinger溶液中，

3、稍加微熱(30～40℃)，使之溶解，用濾紙過(guò)濾后，即為1％原液。取1％原液l?ml加入49ml?Ringer溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。稱(chēng)取50mg詹納斯綠B溶于5mlRinger溶液中，稍加微熱(30～40℃)，使之溶解，用濾紙過(guò)濾后，即為1％原液。取1％原液l?ml加入49ml?Ringer溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。稱(chēng)取50mg詹納斯綠B溶于5mL?Ringer溶液中，稍加微熱(30～40℃)，使之溶解，用濾紙過(guò)

4、濾后，即為1％原液。取1％原液lmL加入49mL?Ringer溶液，即成1/5000工作液裝入瓶中備用。最好現(xiàn)用現(xiàn)配，以保持它的充分氧化能力。四、實(shí)驗(yàn)方法(一)線粒體的超活染色與觀察洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察1/5000詹納斯綠Ｂ溶液１-2滴，洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，載玻片于37℃恒溫水浴染色10-15min，顯微鏡下觀察．(二)小麥幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察初生小麥幼苗根尖（１－２cm）縱切面切片，1/3000中性紅溶液１滴染色5-10min，載玻片于37℃恒溫水浴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察．五、作業(yè)

5、繪出你所觀察到的液泡及線粒體并簡(jiǎn)要分析