熒光定量PCR中TaqMan熒光探針的原理及SYBR熒光染料的作用。.doc

《熒光定量PCR中TaqMan熒光探針的原理及SYBR熒光染料的作用。.doc》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、熒光定量PCR中TaqMan熒光探針的原理及SYBR熒光染料的作用。2011-05-1708:41什么是TaqMan熒光探針和SYBR熒光染料？熒光定量PCR中TaqMan熒光探針的原理及SYBR熒光染料的作用。????TaqMan熒光探針：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到

2、熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。再通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程熒光信號(hào)的積累，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比進(jìn)行定量分析。?????SYBR熒光染料：在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料能特異性地?fù)饺隓NA雙鏈，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，這樣就保證了熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。當(dāng)PCR循環(huán)復(fù)制時(shí)DNA雙鏈也成倍增長，同樣SYBR染料的熒光的信號(hào)也隨之增倍，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程中熒光信號(hào)的積累，

3、與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比進(jìn)行定量分析。