ybox結(jié)合蛋白1在胃癌組織中的表達(dá)及意義

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1、Ybox結(jié)合蛋白1在胃癌組織中的表達(dá)及意義【關(guān)鍵詞】胃癌;Ybox結(jié)合蛋白1;免疫組織化學(xué);原位雜交　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheexpressionandsignificanceofYboxbindingprotein1(YB1)inpatientsaofdifferentstages.MethodsExpressionsofYB1proteinandmRNAinspecimensofnormaltissues,intestinalmetapla

2、sia,earlygastriccancerandadvancedgastriccancermunohistochemistryandinsituhybridization.ResultsThereRNAinnormalgastrictissues.Houcosainintestinalmetaplasia.YB1ucosaofepithelialcellsintheearlystageofgastriccancer,anditsexpressionayberelatedtotheearlypathog

3、enesisanddevelopmentofgastriccarcinoma.　　KEYHCⅡ類基因的轉(zhuǎn)錄[5]。研究表明，YB1可被絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Akt磷酸化，該磷酸化使得YB1的mRNA5末端的結(jié)合力加強(qiáng)，從而使其易位活性增強(qiáng)，這也可能與細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化相關(guān)[6]。　　以上研究均表明，YB1在腫瘤細(xì)胞的增殖及腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和預(yù)后中均發(fā)揮其生物學(xué)作用，但其在胃癌中的研究尚未見報道。因此，我們采用免疫組織化學(xué)和原位雜交的方法檢測了YB1在胃癌組織中的表達(dá)情況，以探討其可能的作用機(jī)制。

4、　　1材料與方法　　1.1標(biāo)本采集收集病理確診手術(shù)切除的胃腺癌標(biāo)本63例，其中早期胃癌25例，進(jìn)展期胃癌38例;腸黏膜化生組織23例。以上患者無其他系統(tǒng)性疾病，在術(shù)前均未接受放射和化學(xué)治療。21例正常組織來自胃鏡活檢組織。其中男12例，女9例;35～50歲者12例，51～72歲者9例。胃癌組與正常組的一般情況比較無顯著差異性?！　?.2主要試劑YB1多克隆抗體(5μg/mL)為日本學(xué)者贈送;原位雜交試劑盒購自武漢博士德生物公司;YB1的探針序列為：5′>GCCGCTGCCCGTAG　　TGCC

5、GGGCTTGGTGTC<3′，地高辛標(biāo)記，與人類其他基因無同源性?！　?.3方法　　1.3.1YB1的免疫組化定位新鮮胃癌組織于100mL/L的甲醛溶液中固定48h，石蠟包埋;切片經(jīng)脫蠟、水化后，用30mL/L雙氧水孵育10min，以去除組織內(nèi)固有的過氧化物酶。枸櫞酸緩沖液修復(fù)抗原：92℃水浴15min，室溫冷卻1h;血清封閉液、卵白素封閉液和生物素封閉液各孵育15min，以去除非特異性染色。一抗4℃結(jié)合21h，二抗孵育40min，辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素復(fù)合物孵育30min，二氨基聯(lián)苯胺(D

6、AB)染色，蘇木素復(fù)染。陰性對照用羊血清代替一抗或二抗?！　?.3.2原位雜交方法參照文獻(xiàn)所述[67]，步驟如下：活檢組織經(jīng)固定、包埋、切片、脫蠟、水化后，用30mL/L雙氧水(DEPC配制)孵育10min，DEPC水洗6min;蛋白酶K37℃消化30min，以去除阻礙探針結(jié)合的表面蛋白;PBS和DEPC各水洗6min;每片加預(yù)雜交液20μL，42℃孵育2h;加入13pmol/L的寡核苷酸探針20μL，42℃雜交22h;2×SSC和1×SSC液各洗15min;羊血清封閉液37℃封閉30min，生物素化的

7、鼠抗地高辛37℃孵育30min，辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素復(fù)合物37℃孵育30min;DAB染色，蘇木素復(fù)染。陰性對照用預(yù)雜交液代替雜交液。陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：角質(zhì)形成細(xì)胞中有棕黃色顆粒沉著，陰性無此沉著?！　?.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。組間兩兩比較采用卡方檢驗和精確概率法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義?！　ig.1ExpressionofYB1innormaltissues,intestinalmetaplasiaandgastriccarcinomatissues(D

8、AB,×200)　　A：正常組織中YB1無表達(dá);B：腸化生組織中YB1陽性染色于胃黏膜上皮細(xì)胞中，但表達(dá)較弱;C：早期胃癌中YB1表達(dá)于全層胃黏膜上皮細(xì)胞中;D：進(jìn)展期胃癌中YB1表達(dá)弱于早期胃癌?！　?.2YB1mRNA的表達(dá)情況mRNA的表達(dá)部位同蛋白。在正常組織中，YB1mRNA在胃黏膜上皮細(xì)胞中未見表達(dá)(圖2A);在腸化生組織中，可見YB1mRNA陽性染色于胃黏膜上皮細(xì)胞中，但表達(dá)較弱，不是所有的細(xì)胞均著