不同濃度rhepo對神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖的影響

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1、不同濃度rhEPO對神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖的影響：胡萌，呂剛，梅晰凡，張世民【摘要】目的觀察不同濃度rhEPO對神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖的影響，探討rhEPO聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷修復(fù)的影響。方法用不同濃度(5、50、500U/mL)rhEPO干預(yù)從新生SD大鼠(出生24h以內(nèi))取材來的神經(jīng)干細(xì)胞，分別檢測每組神經(jīng)干細(xì)胞克隆形成率;在不同時(shí)間分別用MTT法檢測細(xì)胞增殖率;神經(jīng)干細(xì)胞分化的免疫細(xì)胞化學(xué)染色及計(jì)數(shù)。結(jié)果添加rhEPO各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖較快最終神經(jīng)球的數(shù)量多于對照組,以50U/mLrhEPO組作用顯著;添加rhEPO各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞生長曲線均高于對照

2、組,尤其是50U/mLrhEPO組顯著高于對照組;NSE和GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)染色和計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,50U/mLrhEPO組中NSE免疫陽性細(xì)胞明顯多于對照組(P<0.01)。結(jié)論rhEPO對神經(jīng)干細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖有促進(jìn)作用，尤以適中濃度(50U/mL)作用更加明顯?！娟P(guān)鍵詞】神經(jīng)干細(xì)胞;rhEPO;體外培養(yǎng);增殖Abstract:ObjectiveToobservetheeffectultipliesinvitroraisetothenervestemcellofdifferentdensityrhEPO,andtodiscusstheinfluenceo

3、frhEPO,associatedcelltransplant,incuringspinalcorddamagerepair.MethodsThepresentresearchfirstlyintervenedthenervestemcell,obtainedfromtheneouse(bornL).Then,adistinctiveexaminationoftherateofcloneformationineachgroupsnervestemcellsethodinethecellreproducibilityindifferenttimesandnerv

4、estemcelldifferentiationsimmunocytochemistrydyeingandcounting.ResultsThecellmultiplicationinexperimentalgroupsarkablein50U/mLEPOgroup.Thecellgroentalgroupsarkablein50U/mLEPOgroup.TheNSEandGFAPimmunocytochemistrydyeingandthecountingresultsshomunitymasculinecellsinthe50U/mLEPOgroupore

5、thanthatinthecontrolgroup(P<0.01).ConclusionsrhEPOhasthepositiveeffectonthenervestemcellinvitroraisemultiplication,oreobviousoderatedensity(50U/mL).　　Keycell;rhEPO;invitroraise;multiplication　　神經(jīng)干細(xì)胞(nervestemcell,NSCs)是一種具有復(fù)制能力和多向分化潛能的原始細(xì)胞，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的修復(fù)研究中逐漸引起醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)干細(xì)胞不

6、僅存在于胚胎腦組織,而且已發(fā)育成熟的內(nèi)也存在神經(jīng)干細(xì)胞[1]。正常情況下這些NSCs處于“靜止”或“休眠”狀態(tài)，在特定因素的作用下，例如損傷或刺激，其分裂、分化的潛能就被激活，從而出現(xiàn)增殖現(xiàn)象。堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basicfibroblastgroega公司)、胰蛋白酶、谷氨酰胺(Sigma)，MTT(噻唑蘭)、DMSO(二甲基亞砜)，及其他相關(guān)試劑?！　?.2方法　　1.2.1神經(jīng)干細(xì)胞的原代培養(yǎng)　?、傩律鶶D大鼠經(jīng)75%酒精消毒，無菌條件下將前腦完整取出，借助顯微鏡在視交叉平面和海馬平面各做一道冠狀切口，留取自視交叉至海馬約2mm厚的腦塊。將留取的腦塊

7、冠狀面朝上放置，然后在側(cè)腦室外側(cè)做兩道矢狀切口，并且在胼胝體上方做一水平切口，留取中間圍繞側(cè)腦室前角的腦塊。此部位包含側(cè)腦室前角室下帶(subventricularzone，SVZ)，富含神經(jīng)干細(xì)胞。②去除軟腦膜和脈絡(luò)叢組織。將腦組織轉(zhuǎn)移到另一培養(yǎng)皿，用剪刀反復(fù)剪切至約1mm3大小組織塊，加入DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基2～3mL,用吸管反復(fù)吹打，制成細(xì)胞懸液。③將細(xì)胞懸液用200目銅網(wǎng)過濾，去除殘留未分散組織，將濾液移入無菌10mL離心管。離心機(jī)將過濾的細(xì)胞懸液以1000r/min離心10min，以便收集細(xì)胞。④吸管小心吸除上清液體，將沉淀的細(xì)胞重懸于2mL含B

8、27和20ng/mLbF