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《蒙藥冷蒿的遺傳多樣性隨機引物多態(tài)性分析論文》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、蒙藥冷蒿的遺傳多樣性隨機引物多態(tài)性分析論文劉越潘寧，黃怡鶴，溫婧，周廉【摘要】目的研究內(nèi)蒙古通遼地區(qū)蒙藥冷蒿的遺傳特異性及通遼、呼和浩特、錫林郭勒3個不同地區(qū)蒙藥冷蒿的遺傳多樣性。方法采用隨機引物多態(tài)性(RAPD)方法，從17組RAPD引物中篩選出13組條帶清晰、多態(tài)性明顯并且重復性好的引物用于實驗，并利用Popgen32和NTSYS軟件進行數(shù)據(jù)計算與聚類分析。結果①13組引物共產(chǎn)生的209條帶中，有201條多態(tài)性帶，多態(tài)位點百分率達96.17%。②3個地區(qū)蒙藥冷蒿Ht=0.2381.freelisiafrigidainTong
2、liaopopulationandthreedifferentregionsofInnerMongolia(Tongliao,Hohhot,Xilingol).Methods13groupsofprimersorphicandreproduciblebandsthe17groupsofprimersbyrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)method.Thebandsproducedbythe13groupsofprimersersgenerated209bands,including201po
3、lymorphicbands.Thepercentageofpolymorphiclociationisiafrigidapopulationongpopulations(Dst)ongpopulations(Gst)thegeicvariationongpopulations.Keyisiafrigidpopulation;ImprovedCTAB;RAPD;Geicdiversity蒙藥冷蒿Atremisiafrigida(蒙語：阿給)，又名小白蒿、菟毛蒿，菊科蒿屬的小灌木，是蒙醫(yī)的常用藥，主要分布在內(nèi)蒙古1～3。近年來，隨
4、著中藥材標準化進一步深入，為提高中藥質(zhì)量和臨床效果，中藥材的道地性的研究越來越受到重視4～6。但對民族藥的道地性研究甚少。長期以來，蒙藥冷蒿一直在民間用于出血疾病的治療7。研究發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地來源的蒙藥冷蒿制炭后止血效果差異顯著，而且來自荒漠草原的蒙藥冷蒿制炭后活性成分的含量偏高。目前，冷蒿藥材來源為野生冷蒿，隨著荒漠化的進程，以及藥材的大量開采，將使冷蒿變成瀕危物種。為了避免野生藥用植物的枯竭，勢必要進行藥材的規(guī)范化栽培種植(GAP)，對冷蒿遺傳背景的分析，不但可以從遺傳學角度觀察引起冷蒿質(zhì)量變異的原因，也可以為冷蒿栽培種植提供
5、理論指導。在PCR基礎上建立起來的隨機擴增多態(tài)性(randomamplifiedpolymorphicDNA，RAPD)分子標記技術，以其技術簡單易行，分析速度快，成本低，不用進行DNA克隆、southern雜交等復雜程序的優(yōu)點，特別適合于遺傳背景不清楚的材料的研究，在中藥材鑒定與遺傳多樣性研究中應用廣泛8～10。本實驗采用RAPD方法，考察冷蒿的遺傳結構，探討冷蒿止血活性成分變異的遺傳學基礎。1材料2007-11分別在呼和浩特、錫林郭勒盟當?shù)厥占漭锔伤幉?2008-09在內(nèi)蒙古通遼市奈曼旗采集冷蒿植株，并用冰塊冷凍保存。3個
6、冷蒿群體編號見表1，群體間空間距離大于500km。2方法2.1基因組DNA的提取與測定基因組DNA采用改進的CTAB法11提取。DNA大小及其完整性采用標準濃度的λDNA/HindⅢ檢測，采用SAM3000微量紫外/可見分光光度計測定A260、A280及A230，據(jù)此推知各樣本總DNA的含量。2.2RAPD引物的篩選參照王靜12以及本實驗室11的方法，優(yōu)化PCR反應體系，對單一DNA樣品多引物進行RAPD-PCR擴增。在Bio-RADGelDoc2000凝膠成像系統(tǒng)上觀察拍照。最后，篩選出可產(chǎn)生多態(tài)性且重復性好的引物組合。表1材
7、料來源Tongliao)E122.16500350～450沙地31株H呼和浩特N40.82(Hohhot)E111.81580335～534.6荒漠草原藥材L錫林郭勒N43.95(Xilingol)E115.46790295典型草原藥材2.3數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析構建二元數(shù)據(jù)矩陣，RAPD為顯性標記，同一引物的擴增產(chǎn)物在電泳中遷移率相同的條帶被認為是同源性的，屬于同一位點的條帶按清晰可見的強帶或反復出現(xiàn)的弱帶記為1，無帶記為0，形成二元數(shù)據(jù)矩陣。根據(jù)“0-1”原始矩陣，用Popgen32軟件計算多態(tài)位點比率(P)、Nei's遺傳多樣
8、性指數(shù)(h*)、Shannon信息指數(shù)(I*)、總?cè)后w的基因多樣性(Ht)、群體內(nèi)基因多樣性(Hs)、群體間基因多樣性(Dst)、基因分化系數(shù)(Gst)、遺傳距離(D)和遺傳一致度(I)。利用NTSYS軟件進行各品種間UPGMA(unethodeticmean)
