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《利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性dna技術(shù)分析刺五加的遺傳多樣性論文》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)分析刺五加的遺傳多樣性論文邢朝斌，勞鳳云，吳鵬，李玉彥，沈海龍【摘要】目的從DNA水平對收集的4個(gè)產(chǎn)地的刺五加進(jìn)行遺傳多樣性分析，為更好地開發(fā)利用刺五加資源奠定基礎(chǔ)。方法隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）技術(shù)分析遺傳多樣性，UPGMA進(jìn)行聚類分析。結(jié)果10個(gè)隨機(jī)引物擴(kuò)增得到72條片段，多態(tài)性位點(diǎn)比率為88.89％。不同產(chǎn)地間的遺傳相似系數(shù)在0.4693～0.7851之間.freelfourhabitatsilarity,thenclusteranalysisethod.ResultsT
2、enrandomprimersgenerated72bands(rateofpolymorphicbandsilarityindexamongdifferenthabitatseanvalueilarityindexamongdifferentpopulationsofEleutherococcussenticosusfromthesamehabitateanvaluedifferenthabitatsdifferentpopulationsgroehabitatandthesimilarityofEleuth
3、erococcussenticosusfromMulingseparatedotherhabitatsfromHelong,BenxiandShangzhi.TheresultsalsoshoilarityamonghabitatsentdifferenthabitatsbyRAPD.Key），并進(jìn)行日常管理與維護(hù)。表1植物材料來源（略）1.2總DNA的提取利用Tiangen公司植物基因組DNA提取試劑盒提取新鮮葉片的基因組DNA，將準(zhǔn)備好的DNA溶于適量的TE緩沖液，用分光光度法測定DNA的濃度和純度，并將其
4、調(diào)整為20μg/μl。1.3RAPD產(chǎn)物及檢測從40個(gè)RAPD隨機(jī)引物中選取了10個(gè)多態(tài)性高、重復(fù)性好的引物(見表2)，在4個(gè)產(chǎn)地10個(gè)居群間進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系如下：25μl體系中包括模板DNA100ng，引物100ng，Taq酶1U，含(NH4)2SO4的10×buffer2.5μl［750mmol/LTris-HCl（pH8.8），200mmol/L(NH4)2SO4，0.1%Tmol/L的MgCl22.5μl，在PTC-100TMPCR儀上進(jìn)行，程序如下：94℃預(yù)變性2min，然后進(jìn)行以下40個(gè)循環(huán)
5、：94℃30s，40℃30s，72℃1min，最后72℃延伸5min。反應(yīng)產(chǎn)物在1.5％瓊脂糖膠上檢測，電壓4V/cm，電泳50min，用BIO-RADGelDoc2000凝膠成像系統(tǒng)記錄拍照。用λDNAHindⅢ作分子量對照。表2所用引物及擴(kuò)增結(jié)果（略）1.4數(shù)據(jù)分析利用CrossChecker軟件，按瓊脂糖凝膠同一位置上DNA電泳條帶的有無進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，有帶的標(biāo)記為“1”，無帶的標(biāo)記為“0”，獲得1、0數(shù)據(jù)矩陣。應(yīng)用POPGENE32軟件進(jìn)行UPGMA（Pairgroupmethodusingarithmeti
6、c）聚類分析。2結(jié)果2.1刺五加遺傳多樣性分析結(jié)果從40個(gè)隨機(jī)引物（10堿基的寡核苷酸）中篩選出的10個(gè)能得到清晰擴(kuò)增譜帶且產(chǎn)生多態(tài)性的隨機(jī)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。共擴(kuò)增出72個(gè)可區(qū)分的位點(diǎn)，主要集中在200～2000bp之間，其中64個(gè)表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)性比例高達(dá)88.89％，平均每個(gè)引物產(chǎn)生7.2個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)6.4個(gè)。4個(gè)產(chǎn)地刺五加的多態(tài)性位點(diǎn)比例大小依次為：尚志和龍本溪穆棱（見表3）。擴(kuò)增結(jié)果見圖1。由Nei指數(shù)估算的基因多樣性結(jié)果與多態(tài)性位點(diǎn)比例大小順序相同（見表3）。由POPGENE32算出的總
7、居群基因多樣度（Ht）、居群內(nèi)基因多樣度（Hs）和基因分化系數(shù)（Gst）在4個(gè)產(chǎn)地10居群上分別為：0.4529，0.1794，0.6039；在產(chǎn)地和龍7個(gè)居群上分別為：0.3594，0.1957，0.4555。表34產(chǎn)地刺五加的遺傳多樣性（略）不同產(chǎn)地刺五加間的平均遺傳相似系數(shù)為0.6293。產(chǎn)地和龍（吉林省延邊地區(qū)）與產(chǎn)地穆棱（黑龍江省牡丹江地區(qū)）、本溪（遼寧?。?、尚志（黑龍江省哈爾濱地區(qū)）之間的平均遺傳相似系數(shù)分別為：0.4693，0.7532，0.7851，產(chǎn)地穆棱與產(chǎn)地本溪、尚志間的遺傳相似系數(shù)分別為
8、：0.5710，0.5177，產(chǎn)地本溪與產(chǎn)地尚志之間的遺傳相似系數(shù)為0.6797（見表4）。以產(chǎn)地和龍的7個(gè)居群為試材研究了同一產(chǎn)地不同居群刺五加的RAPD遺傳多樣性。結(jié)果表明，其平均遺傳相似系數(shù)為0.7644，最小值為0.5630，最大值為0.9542。見表4。表44產(chǎn)地刺五加的相似系數(shù)與遺傳距離矩陣（略）P01-P10為供試樣品編號(hào)同表1；斜線上方為遺傳相似系數(shù)，下方為遺傳距離。2
