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1、鉤藤散浸膏對亞急性衰老模型小鼠的影響論文.freelemory，malondiadehyde（MDA），superoxidedismutase（SOD），ACHEinmicetostudytherapeuticeffectsandmechanismofGoutengsanonagingmodel.MethodsMicelydividedinto6groups.Allgroups，exceptthecontrol，inistrated（ip）entalgroupsinanextract-treatedmiceiceentofcholinergicnerves
2、ystem.【Keyice老年癡呆是威脅人類健康的重大疾病之一，對其的防治一直是全球關注的焦點。鉤藤散源于《本事方》，由鉤藤、石膏、陳皮、麥冬、半夏、茯苓、人參、防風、生姜、甘草、菊花等11味藥組成，原為治療肝厥頭暈之證的經典方劑。本次實驗進行了鉤藤散浸膏的抗衰老實驗，以觀察鉤藤散浸膏在抗衰老方面的影響及機制。1材料1.1藥品與試劑（1）鉤藤散：由本院中藥制劑室按傳統(tǒng)方法水提、濃縮、消毒等制成浸膏。臨用前每19ml鉤藤散浸膏加蒸餾水配至100ml，變成0.5g生藥/ml清膏溶液，實驗中所用劑量均以生藥量計。（2）維生素E膠丸：廈門魚肝油廠（批號：10842
3、002）。用前將維生素E膠丸用蒸餾水按10粒/100ml蒸餾水配成溶液。（3）D-半乳糖：國藥集團化學試劑有限公司（批號：20050121）。（4）乙酰膽堿酯酶（ACHE）活性測定試劑盒：南京建成生物工程研究所（批號：20050225）。（5）超氧化物歧化酶（SOD）活性測定試劑盒：南京建成生物工程研究所（批號：20041221）。（6）丙二醛MDA活性測定試劑盒：南京建成生物工程研究所（批號：20041224）。1.2動物清潔級KM小鼠：18-22g，雌雄各半，由中科院上海實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（滬）2002-0010。1.3儀器（1）MG
4、-2迷宮：張家港市生物醫(yī)學儀器廠生產。（2）高速冷凍離心機：貝克曼產品。（3）721分光光度計：上海第三分析儀器廠產品。（4）高速分散器XHF-1：上海金達生化儀器廠產品。1.4實驗環(huán)境清潔級，合格證號：SYXK（蘇）2002-0007。2方法2.1分組、造模、給藥將小鼠分為6組，每組12只，雌雄各半，先進行造模，正常對照組皮下注射等體積生理鹽水（1ml/kg），其余各組每天皮下注射D-半乳糖，0.05g/kg體重，連續(xù)注射6周。注射7天后開始給藥，實驗高劑量組每天灌胃給10g生藥/kg體重，中劑量組5g/kg，低劑量組2.5g/kg，陽性對照組每天給維生
5、素E0.05g/kg體重，模型對照組與正常對照組每天給等量的蒸餾水，每天灌胃1次，每次0.2ml/10g體重；連續(xù)給藥5周。2.2學習訓練［1］最后1天給藥后1h進行學習訓練，訓練時，將小鼠放入Ⅰ臂起步區(qū)停留3min后給予電擊（35V），按Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→Ⅰ或Ⅰ→Ⅲ→Ⅱ→Ⅰ連續(xù)試驗：a項:小鼠到達安全區(qū)停留0.5min，然后取出放回原臂，1min后給予下次電擊，達到連續(xù)2次直接逃至安全區(qū)后，以逃入的安全區(qū)作為起步區(qū)進行電擊訓練。當小鼠在三臂均達到連續(xù)2次直接逃至安全區(qū)后，進行b項試驗：小鼠在Ⅰ臂起步區(qū)停留1min后給予電擊，逃至安全區(qū)停留0.5min，再以此區(qū)
6、作為起步區(qū)予以電擊，連續(xù)循環(huán)電擊訓練（每兩次電擊之間休息1min），以小鼠連續(xù)10次（或9/10）正確反應（直接逃入安全區(qū)）作為空間辨別記憶指標，每回連續(xù)學習的電擊總次數(shù)一般不超過30次。最后將a項和b項相加作為訓練成績。2.3記憶測試訓練后24h進行測試，測試方法同訓練，將a項和b項相加作為學習成績。2.4血中SOD、ACHE測定測試后眼眶取血，3000r/min離心，取上清液按試劑盒說明書所述步驟操作，測定ACHE、SOD活力。2.5腦中MDA的測定小鼠取血后處死取腦，置勻漿器中，加入預冷生理鹽水制成10%（g/ml）的腦勻漿，按試劑盒說明書所述步驟操
7、作，測定蛋白質含量和MDA含量。2.6統(tǒng)計學分析數(shù)據用x±s表示，組間比較用t檢驗。3結果3.1對學習記憶的影響模型組訓練、測試成績都極顯著差于正常組（P＜0.01），說明造模成功；實驗組訓練、測試成績都和正常組相近，而極顯著地好于模型組（P＜0.01），說明給藥后鉤藤散浸膏抑制了D-半乳糖所致的衰老，使記憶恢復如常，見表1。表1鉤藤散浸膏對D-半乳糖衰老模型小鼠記憶的影響（x±s，n=12）Tab.1EffectsofGTSextractonmemoryofmicedodderymodelscreatedbyD-galactose注：與模型組比較，*P＜
8、0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與正常組比較，△
