葛根黃酮對亞急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究

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1、葛根黃酮對亞急性衰老模型小鼠抗氧化作用的研究作者：鄭王巧郭春花張曉一宋麗華來麗娜李海菊【摘要】目的：考察葛根黃酮對衰老模型小鼠抗氧化能力的影響。方法：用D半乳糖制備衰老模型小鼠，分為正常對照組、模型組、陽性對照組、高、低劑量組，檢測各組小鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH—PX)水平變化。結(jié)果：葛根黃酮能顯著降低衰老小鼠血清MDA水平，同時可提高SOD和GSH—PX活力水平。結(jié)論：葛根黃酮對亞急性衰老模型小鼠具有抗氧化作用?！娟P(guān)鍵詞】葛根黃酮;抗氧化;

2、亞急性衰老模型D半乳糖致小鼠亞急性衰老模型因其衰老變化明顯，模型穩(wěn)定，在抗衰老研究中被廣泛應(yīng)用。一般認(rèn)為，D半乳糖引起的代謝紊亂使機體過氧化反應(yīng)增強是其致老化反應(yīng)的重要因素。葛根黃酮(Puerarin7flavonoid)系葛根中的主要成份之一，葛根始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,為豆科植物野葛和粉葛的干燥根，具有解肌退熱、生津透疹、升陽止瀉的功效。葛根主要有效成分為葛根黃酮和大豆苷元。葛根黃酮藥理作用研究較多，臨床應(yīng)用非常廣泛，對心腦血管疾病、視網(wǎng)膜疾病等具有良好療效。體外研究表明[1-4]，葛根黃

3、酮具有較強的抗氧化能力，能明顯清除·OH、DPPH·自由基，可用于防止生物膜的氧化損傷。本研究采用D半乳糖致小鼠亞急性衰老模型，以觀察葛根黃酮對衰老模型小鼠抗氧化能力的影響。　　1材料與方法　　1.1葛根黃酮的提取[5]取葛根藥材粉碎成粗粉，置圓底燒瓶中，加95%乙醇回流1h，抽濾，保留濾液，藥渣加95%乙醇回流1h，抽濾，濾液合并，回收乙醇并濃縮成膏狀，真空干燥得粗提物，將粗提物加入蒸餾水后加熱煮沸，冷卻到室溫過濾，再將濾液中加入NaC1后攪拌溶解，靜置2d析出白色沉淀，過濾出沉淀并用少量水

4、洗滌，得葛根黃酮純品?！　?.2試劑與儀器陽性對照藥維生素E膠丸(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，批號20090206);D(+)半乳糖(上海君創(chuàng)生物科技有限公司);SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20090102);MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20081205);GSH—PX試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20090209);TDL5000低溫冷凍離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠);TU1901紫外可見分光光度計(北京普析通用);電熱恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司);

5、萬分之一電子天平(賽多利斯丹佛公司)。超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)、GSH—PX含量測定均按試劑盒說明書測定。7　　1.3動物分組與處理健康昆明小鼠75只(實驗動物中心提供)，體重(18±2)g，雌雄各半，喂養(yǎng)普通飼料適應(yīng)1W后，空腹稱重，眼底靜脈采血測血清MDA后隨機分為5組，每組15只，雌雄各半。組間體重、血清MDA水平無明顯差異。5組分別為正常組(腹腔注射(ip)生理鹽水+灌胃(ig)蒸餾水)，衰老模型組(ipD(+)半乳糖200mg·kg-1+ig蒸餾水)，低劑量組(i

6、pD(+)半乳糖200mg·kg-1+ig葛根黃酮50mg·kg-1)，高劑量組(ipD(+)半乳糖200mg·kg-1+ig葛根黃酮150mg·kg-1)，陽性對照組(ipD(+)半乳糖200mg·kg-1+ig維生素E100mg·kg-1)?！　?.4標(biāo)本采集本實驗用昆明小鼠ipD(+)半乳糖造成衰老模型，ipD(+)半乳糖5W后，模型組小鼠血清MDA高于正常對照組，但無統(tǒng)計學(xué)意義;當(dāng)時間增至7W后，血清MDA明顯高于正常，兩組數(shù)據(jù)比較有顯著意義，故實驗時間定為7W。7W后取材，所有小鼠于取

7、材前1d停飼料，并禁食12h，乙醚麻醉，眼底靜脈取血，離心取血清備用?！　?.5統(tǒng)計方法采用SPSS13.0軟件處理，實驗數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間比較用方差分析，兩均數(shù)比較用t檢驗，顯著性界值P=0.05?！　?結(jié)果7　　2.1葛根黃酮對衰老模型小鼠血清脂質(zhì)過氧化物MDA含量的影響　　結(jié)果見表1。MDA可反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細(xì)胞受損的程度。血清MDA測定數(shù)據(jù)顯示：模型組血清脂質(zhì)過氧化物MDA含量比正常飼料組有明顯增高(P<0.001)，陽性對照組及高劑量組均能明顯降低血清M

8、DA水平，與模型組比較均有顯著性意義(P<0.01);低劑量組血清MDA與模型組比較有所降低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?！　?.2葛根黃酮對衰老模型小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)含量的影響　　結(jié)果見表1。SOD對機體的氧化和抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。血清SOD測定數(shù)據(jù)顯示，模型組血清SOD含量與正常飼料組相比有顯著性差異(P<0.001)，陽性對照組及高劑量組均能明顯升高血清SOD活力水平，與模型組比較均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，低劑量組血清SOD與模