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1、葎草多糖的超聲提取及抑菌活性研究論文【摘要】目的優(yōu)化葎草多糖的超聲輔助提取工藝，并研究其抑菌活性。方法以多糖中的葡萄糖含量為指標，對超聲波功率、料液比和超聲時間進行L9（34）正交實驗，確定超聲輔助提取葎草粗多糖的最佳工藝。用DE-52交換柱對葎草粗多糖進行分離，以濾紙片法研究葎草粗多糖和多糖分離組分的抑菌能力。結(jié)果以水為提取溶劑，料液比1∶28（g/ml），超聲功率120ethodsTakingthecontentofglucoseasobservationindex,izedtheextractionprocessbyL9（3
2、4）orthogonalexperiment.TheHumulusscandenspolysaccharides(HSP)atographyeansoffilterpaper.ResultsTheoptimalextractionconditionsl,120err.又名拉拉藤，拉拉秧，一年生或多年生草本植物，全國各地幾乎均有分布。葎草生長旺盛，富含營養(yǎng)，既可以作為飼料，提高飼喂動物的生長狀況，又可以藥用，有清熱解毒、利尿消腫之功效［1］。據(jù)文獻報道，葎草中含有木犀草素、葡萄糖苷、膽堿、揮發(fā)油、鞣質(zhì)、樹脂、天門冬酰胺等物質(zhì)［2］，
3、其提取物具有抗結(jié)核菌的功效［3］，因而漸漸引起人們的研究興趣。近年對于葎草中的木犀草素、黃酮類物質(zhì)的提取已有少量研究［4，5］，但對葎草中多糖類物質(zhì)的提取和活性研究還未見報道。本文采用超聲波輔助提取方法制備葎草總多糖，并對多糖的抑菌活性進行研究，以期為這一優(yōu)勢植物資源的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。1材料與儀器1.1材料葎草，采自江蘇科技大學(xué)校園內(nèi)，晾干后粉碎過100目篩，干粉于干燥器中密封保存。大腸桿菌Escherichiacoli、金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus、蘇云金芽孢桿菌Bacillusthurin
4、giensis、鏈球菌Streptococcus，由本校生物與環(huán)境工程學(xué)院微生物實驗室提供。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（牛肉膏3.5g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，瓊脂20.0g，水1000ml，pH7.0～7.2，121℃滅菌30min）。1.2試劑葡萄糖、硫酸、苯酚、活性炭、乙醇、牛肉膏、蛋白胨等，均為國產(chǎn)分析純。1.3儀器UV-9100紫外分光光度計，KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器，F(xiàn)A2104型電子精密天平，AvantiJ-25高效大容量冷凍離心機（Beckman），DHG-9203A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，瑞士Buch
5、i旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮儀，Hl后離心，上清液加入95％乙醇醇沉；沉淀物蒸餾水復(fù)溶，10%三氯乙酸除蛋白；上清液活性炭脫色，透析袋透析后再次醇沉，沉淀依次用乙醇、丙酮洗滌，揮去殘余水分，真空干燥，即得葎草粗多糖（HSP）干品。2.1.3粗多糖的分離純化將70.0g二乙胺基乙基纖維素（DE-52）依次用500ml雙蒸水、500ml0.5mol/L的氫氧化鈉、鹽酸、氫氧化鈉處理，0.5h/次，不時攪拌，并用雙蒸水處理至中性，裝柱柱規(guī)格：2.5cm×30cm。精密稱取HSP100.0mg上樣，在室溫下依次用0，0.2，0.4，0.8，1.0mol
6、／LNaC1溶液梯度洗脫，洗脫速度5.0ml/min，每管收集5.0ml。苯酚-硫酸法［6］跟蹤檢測，收集洗脫高峰部分，透析后減壓濃縮，即得精制的葎草多糖組分。2.2多糖含量的分析方法2.2.1多糖含量的測定采用硫酸-苯酚法［6］。精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖20.0mg，置于100ml容量瓶中，蒸餾水定容為標準溶液。分別量取一定體積的標準溶液，配成濃度為0，10，20，30，40，50，60μg/ml的葡萄糖稀釋液。精密吸取上述稀釋液各1.0ml，置于10ml容量瓶中，加入5％的苯酚溶液1.0ml，搖勻后再加入濃硫酸5.0
7、ml，充分混勻后放置30min，冷卻到室溫后，在波長490nm處測定吸光度，繪制標準曲線（回歸方程為Y=0.0111X-0.0141，r=0.9991）。2.2.2換算因子測定精密稱取80℃干燥至恒重的純化葎草多糖HSP-II10.0mg，加蒸餾水定容至50ml，配成葎草多糖儲備液。苯酚硫酸法測定吸光度，測得其葡萄糖含量。換算因子=g），C為多糖儲備液中葡萄糖質(zhì)量（mg），D為多糖的稀釋因素。實驗測定結(jié)果換算因子為4.47。2.2.3多糖含量計算多糖含量(%)=（C×D×F/g），D為多糖溶液的稀釋倍數(shù)，F(xiàn)為換算因子，g）。2.3
8、葎草多糖的抑菌活性［7，8］將供試菌種分別接種到裝有培養(yǎng)基的試管內(nèi)，進行擴大培養(yǎng)（37℃培養(yǎng)24h）。取活化好的菌種斜面，用無菌生理鹽水配制成106個／ml的菌懸液，備用。抑菌作用的測定采用濾紙片法。將濾紙用打孔器打成直徑為6mm的圓形小紙片，分裝
