超聲波提取甘草黃酮及其抑菌活性研究論文

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1、超聲波提取甘草黃酮及其抑菌活性研究論文【摘要】的研究甘草中的黃酮提取方法和抗菌活性。方法利用超聲波技術(shù)通過(guò)正交試驗(yàn)提取甘草中的黃酮,杯碟法對(duì)其進(jìn)行抗菌活性的研究。結(jié)果超聲波最佳的提取條件為功率385ethodsUsingultrasonictechnology,flavonoidsGlycyrrhizabyorthogonalexperiment,andtheirbacteriostaticactivityethod.ResultsTheoptimumextractiveconditionsforflavonoids

2、e8min.Ultrasonictechnologyhadthehighestextractionrate6.23%.ThesubstanceextractedshoeantibioticactivityagainstStaphylococcusaureus,Bacillussubtil,Escherichiacoli,Aspergillusniger,penicillium,theminimuminhibitoryconcentration(MIC)g/ml,andminimumbactericidalconcen

3、trations(MBC)g/mlrespectively.ConclusionUltrasonictechnologyisaneffectivemethodforextractingflavonoidsfromGlycyrrhiza,l,搖勻備用。1.2.2對(duì)比實(shí)驗(yàn)煎煮法:稱取甘草粉10g,加水200ml,浸泡30min,煮沸后,文火煎60min,過(guò)濾,共煎煮兩次,合并濾液,定容至100ml,搖勻備用。連續(xù)回流提取法:稱取甘草粉10g,加80%乙醇200ml,水浴回流80min,過(guò)濾,共提取兩次,合并濾液,定容至1

4、00ml,搖勻備用。表1因素水平表(略)1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作稱取在105℃下干燥恒重的蘆丁對(duì)照品10mg,用95%的乙醇溶解,搖勻,定容至10ml使之成為濃度為1mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液,作為儲(chǔ)備液備用。量取上述溶液0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6ml,分別加水至3ml,加5%的亞硝酸鈉溶液0.5ml,放置6min,加10%的硝酸鋁溶液0.5ml,搖勻,放置6min,后加5%的氫氧化鈉溶液2.5ml,混勻,放置15min后蒸餾水定容10ml,用紫外分光光度計(jì)在510nm處測(cè)其吸光度,得到回歸方

5、程為:A=9.9339C-0.00173(R2=0.9975)1.2.4甘草黃酮的抑菌實(shí)驗(yàn)采用杯碟法測(cè)定其抑菌作用,取濃度106~107CFU/ml的各種待試菌懸液0.2ml,與相應(yīng)滅菌培養(yǎng)基15ml混合制成混菌平板,凝固后,在平板上等距離放入4個(gè)滅菌牛津杯,每個(gè)菌設(shè)置3個(gè)重復(fù),一個(gè)無(wú)菌生理鹽水為對(duì)照,取0.1ml黃酮提取液加入牛津杯中,細(xì)菌37℃、真菌28℃培養(yǎng)18~24h后,移去牛津杯,量取抑菌圈直徑,直徑越大抗菌活性越強(qiáng)。1.2.5最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)的測(cè)定用無(wú)菌水將甘草黃酮提取液稀釋

6、,終濃度分別為1,0.5,0.25,0.0625,0.0313,0.0078mg/ml。取2ml提取稀釋液至15ml培養(yǎng)基,混勻后,倒入平板,凝固后加入100μl106~107CFU/ml的菌液,涂布均勻,放至37℃/28℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。菌落被完全抑制的最高稀釋度提取物濃度即MIC。培養(yǎng)48h后,菌落被完全抑制的最高稀釋度提取物濃度為MBC。2結(jié)果與分析2.1超聲波提取法條件的優(yōu)化利用L9(34)正交試驗(yàn)法優(yōu)化甘草黃酮提取條件結(jié)果見(jiàn)表2,各因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響順序?yàn)锳CDB,即超聲波功率對(duì)黃酮提取率的影響效果最

7、為顯著,其次是超聲波時(shí)間。最佳提取條件為A3B2C2D1,即在功率為385in條件下甘草提取液黃酮含量最高。以該最佳提取條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),甘草黃酮提取率為6.23%,RSD=0.862%(n=6),因此該最佳提取條件是可行的。表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)2.2提取方法的比較由表3可知,超聲波提取方法的提取率明顯高于其它兩種方法,且提取時(shí)間最短,提取溶劑用量最少。表3不同的提取方法與黃酮含量的關(guān)系(略)2.3抑菌圈的確定由表4可以看出甘草黃酮提取液對(duì)金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉都有較強(qiáng)的抑菌效果。而且對(duì)細(xì)菌

8、的抑制效果強(qiáng)于真菌。表4黃酮提取液的抑菌效果(略)2.4最低抑菌濃度和最小殺菌濃度的確定結(jié)果見(jiàn)表5。表5甘草黃酮最低抑菌濃度和最小殺菌濃度(略)由表5可知,甘草黃酮對(duì)金色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌、黑曲霉、青霉的最低抑菌濃度分別為0.0625,0.0625,0.0313,0.125,0.25mg/ml;最小殺菌濃度為0.25,0.125,0.

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