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《趨化因子受體ccr7在結腸癌患者外周血cd3+cd8+t細胞上表達及其臨床意義》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、趨化因子受體CCR7在結腸癌患者外周血CD3+CD8+T細胞上表達及其臨床意義(1.青島大學醫(yī)學院；2.山東省泰安市中心醫(yī)院山東泰安271000)??［摘要］目的檢測結腸癌患者外周血中CD3+CD8+T細胞上趨化因子受體CCR7的表達，分析CCR7的表達與結腸癌的病理分化程度、腫瘤大小和臨床分期的相關性。方法利用流式細胞儀檢測44例患者外周血，以CELLQuest軟件分析獲取CD3+CD8+T細胞，檢測CCR7的陽性表達率。比較結腸癌患者與正常人外周血CD3+CD8+T細胞上CCR7的表達情況；比較患者術前、術后外周血CD3+CD8+T細胞上CCR7表達陽性率變化；比較CD
2、3+CD8+T細胞亞群上CCR7表達在術前、術后的變化。結果結腸癌患者外周血CD3+CD8+T細胞上CCR7陽性表達率比正常人低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；術后組外周血CD3+CD8+T細胞上CCR7陽性表達率比術前組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。外周血CCR7的表達與結腸癌腫瘤的大小、腫瘤分化程度、臨床分期、淋巴結轉移等具有顯著相關（P＜0.05）。結論CCR7在結腸癌患者外周血CD3+CD8+T細胞上高度表達，并與結腸癌的病理分化程度、腫瘤大小和臨床分期的密切相關。CCR7的表達可能與促細胞凋亡和抗細胞凋亡蛋白質有關。9［關鍵詞］結腸癌；趨化因子；CCR
3、7；外周血；T細胞；流式細胞術?［中圖分類號］R735.3+5［文獻標識碼］A［文章編號］1672-4208(2008)21-0034-02?趨化因子(chemokine)是由組織細胞或炎性細胞衍生的、具有白細胞趨化活性的肽分子，其能選擇性地引導白細胞亞群的定向游走和組織內(nèi)集聚。根據(jù)趨化因子的氨基酸序列，將趨化因子分為四個亞家族，即CXC、CC、C和CX3C亞家族?[1]。CXC亞家族有IL-8、IP-10，CC亞家族有MCP1~5等。已有研究表明，趨化因子與許多疾病如肺部的支氣管擴張、特發(fā)性肺動脈纖維化、風濕病、動脈粥樣硬化、缺血再灌注損傷等均有密切關系?[2]。由于腫瘤
4、組織存在浸潤的免疫細胞，趨化因子與腫瘤的關系受到關注。但是由于結腸癌臨床的異質性表現(xiàn)，迄今為止尚缺乏有效理想的腫瘤標志物，因此尋找敏感性、特應性高的結腸癌標志物，以提高結腸癌的早期診斷、療效評價和預測預后尤為重要。本研究就是利用流式細胞儀技術檢測趨化因子受體(chemokine9receptor)CCR7在結腸癌患者術前、術后外周血記憶型T細胞亞群上的表達情況，并與正常人相對照，通過與腫瘤免疫逃逸有關的表面抗原以及細胞因子等的檢測，為結腸癌臨床標志物的篩選、結腸癌發(fā)病機制的探討以及結腸癌的綜合防治提供有價值的線索。?1材料與方法?1.1試劑和儀器FACScaliur流式細胞
5、儀：美國BD公司。KDC-160HR低溫高速離心機：科大創(chuàng)新中佳分公司?？烧{式微量移液器：德國Eppendrof公司。CELLQuest獲取和分析軟件：美國BD公司。鼠抗人CD8-FITC、CD3-PE-cy5、CCR7-PE單克隆抗體、溶血素、Falcon管均購自美國BD公司。0.5MEDTA、PBS緩沖液、Tip頭及其他常規(guī)試劑與耗材均為國產(chǎn)。1.2標本來源及分組44例結腸癌患者為泰安市中心醫(yī)院2007年4月～2007年10月住院病人，其中男性34例，女性10例，年齡45~74歲，平均年齡57歲。常規(guī)根治手術后按照UICC1997年結腸癌PTMN分期法進行分期。正常對照
6、組44例選自我院健康查體者，經(jīng)結腸鏡取材并經(jīng)病理證實無胃部疾病。其中男性32例，女性12例，年齡34~84歲，平均年齡59歲。?1.3標本的留取及制備術前2d清晨空腹抽取肘靜脈血2ml置EDTA抗凝無菌試管中送中心實驗室做流式檢測CCR7表達情況。術后7d再次抽血檢測，并查看病人病理情況。將病人按編號在“臨床病例登記信息表”中記錄其姓名、性別、年齡、住院號、籍貫、家族史、飲食習慣、臨床診斷、病理號、病理描述、臨床分期、CEA、CA19-9、CA242。?1.4研究方法及操作步驟9（1）加入標本血。收集結腸癌患者術前、術后以及正常人外周血，分離PBMC后，在Falcon管中各
7、加入5μlCCR7-PE、5μlCD3-PE-Cy5和10μlCD8-FITC標記的抗體，每管加入50μl細胞懸液（5×10?5），充分混勻后，室溫避光孵育15min。同時設同型陰性對照管，只加入50μl細胞懸液。（2）加入溶血素，室溫避光8min。（3）1000r/min離心5min，棄上清，再加入0.9%生理鹽水4ml混勻。（4）重復步驟（3）。（5）1000r/min離心5min，棄上清，加入500μl生理鹽水，上機檢測。（6）流式細胞儀檢測結果，以CELLQuest軟件獲取細胞，設立同型陰性對照，調整電壓，
