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1、細(xì)胞趨化因子受體5在病毒性肝炎患者外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)論文.freelokinereceptor5（CCR5）intheimmunologicalpathogenesisofhepatitisB（HB）.MethodsTheexpressionlevelsofCCR5inperipheralbloodmononuclearcell（PBMC）etrybeforeandafterPHA-inducedcultivationin20HBpatientsand20normalcontrols（NC）.ResultsBeforecultivation，therea
2、rkersthanthatinthoseayberelatedtotheouteofHB，andhigherlevelsofCCR5suggestrelativelyfavorableprognosisandlimitHBVreplication.Keyokinereceptor5趨化性細(xì)胞因子是細(xì)胞因子的一個超家族，其作用的發(fā)生是通過與趨化因子的受體結(jié)合，而趨化因子受體是屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族，含有7個疏水性穿膜區(qū)段的鏈?zhǔn)荏w。趨化因子及其受體是一個進(jìn)展非常迅猛的研究領(lǐng)域，近年來不斷有新的趨化因子及其受體被發(fā)現(xiàn)。細(xì)胞趨化因子受體5（CCchemokiner
3、eceptor5，CCR5）便是其中的一員［1～4］。研究發(fā)現(xiàn)，外周血細(xì)胞中CCR5的表達(dá)與艾滋病病毒感染有一定的關(guān)系，同時發(fā)現(xiàn)CCR5還可作為細(xì)胞表面標(biāo)志物，與激活的輔助性T細(xì)胞亞群1（Th1）和細(xì)胞毒性T細(xì)胞亞群1（Tc1）細(xì)胞密切相關(guān)，而CCR5與乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染的關(guān)系鮮見報道。為了解乙型病毒性肝炎（hepatitisB，HB）患者體內(nèi)的CCR5的表達(dá)狀況，同時探討CCR5在HB發(fā)病機(jī)制中的作用，本實(shí)驗(yàn)用流式細(xì)胞儀對HB患者外周血單個核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC
4、）CCR5的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測，部分作了細(xì)胞培養(yǎng)前后的觀察?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。1材料和方法1.1研究對象29例HB患者為2000年1月―9月徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院傳染科門診及住院患者，HB診斷依據(jù)2000年西安第十次全國病毒性肝炎會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，并以20例健康人（NC）為對照。1.2方法29例HB患者靜脈血檢測CCR5，比較不同臨床類型CCR5的水平。20例進(jìn)行淋巴細(xì)胞分離培養(yǎng)，比較培養(yǎng)前后CCR5水平。20例檢測HBV復(fù)制指標(biāo)，比較不同復(fù)制情況下CCR5水平。1.2.1標(biāo)本的收集與處理無菌采集靜脈血10ml。4ml經(jīng)肝素抗凝，用于淋巴細(xì)胞的分離培養(yǎng)
5、;1ml用EDTA抗凝，直接用于流式細(xì)胞儀檢測29例。20例血清用ELISA及PCR法檢測HBV復(fù)制指標(biāo):HBeAg和HBV-DNA。1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)與收集常規(guī)分離PBMC，Hanks液洗3次，10%FCS-1640培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞濃度為2×109.L，接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔1ml。做3個復(fù)孔。用植物凝血素（PHA）誘導(dǎo)其增殖，終濃度為200mg.L，置37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)48h，培養(yǎng)后的細(xì)胞用PBS洗滌2次，最后用200μlPBS懸浮，待測CCR5。1.2.3流式細(xì)胞儀檢測CCR5將相應(yīng)CCR5陰陽性抗體加于2只空白離心管中，分別為陽性管和陰性
6、管，每管各加入抗凝外周血或培養(yǎng)后的細(xì)胞懸液100μl，充分混勻，4℃避光反應(yīng)20min。在全血樣本管中加溶血劑1ml，混勻放置5min;PBS洗滌，全血樣本管洗3次，培養(yǎng)管洗1次;沉淀用200μlPBS懸浮，上流式細(xì)胞儀檢測。CCR5抗體購自深圳晶美公司。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用ˉx±s表示，2組間比較用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn):α=0.05。2結(jié)果2.1PHA培養(yǎng)前后NC組與HB組的CCR5水平比較培養(yǎng)前，NC組與HB組PBMC的CCR5的表達(dá)無明顯差異（P0.05）;培養(yǎng)后，HB組CCR5高于NC組（P0.05），培養(yǎng)后，HB組、NC組的CCR5表達(dá)較培養(yǎng)前
7、減少，HB組CCR5表達(dá)雖較培養(yǎng)前減少，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而NC組減少具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。見表1。2.2不同臨床類型肝炎患者的CCR5表達(dá)水平比較急性乙型肝炎（acutehepatitisB，AHB）8例、慢性乙型肝炎（chronichepatitisB，CHB）12例、肝硬化（liv-ercirrhosis，LC）9例患者PBMC的CCR5的表達(dá)有一定的差別，AHBCHBLC，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。表1NC、HB組CCR5水平比較（略）與NC組比較:*P0.05;與培養(yǎng)前比較:#P0.05表2HB不同臨床類型PBMC的CCR5比較（
8、略）2.3CCR5與病毒復(fù)制的關(guān)系病毒復(fù)制指標(biāo)陽性組
