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1、談竹蓀提取液對砷中毒小鼠免疫功能的保護作用地方性砷中毒是一種嚴重威脅人類健康的疾病，可以引起神經、泌尿、消化、心血管、免疫、內分泌等多系統(tǒng)、多器官的損傷，甚至可以引起腫瘤的發(fā)生[1，2]。竹蓀是一種食、藥兩用真菌，有學者觀察到竹蓀托蓋液對輻射損傷大鼠免疫系統(tǒng)有一定的修復作用[3]，但對砷引起的免疫損傷是否具有保護作用卻未見報道。在既往竹蓀提取液抗突變和抗氧化損傷研究的基礎上[4，5]，本實驗進一步研究竹蓀提取液對急性砷中毒小鼠免疫系統(tǒng)的損傷是否具有保護作用，為地方性砷中毒的防治提供依據?！ ?材料與方法 1.1主要儀器 酶標儀MQX200（美國BiO-TEK公司）、CO2培養(yǎng)箱（
2、日本三洋公司）、TGLL-18臺式高速離心機（北京長源實驗設備廠）、HH-8恒溫水浴箱（上海申化儀表自控公司）?！ ?.2主要試劑 As2O3(AR)由公共衛(wèi)生學院中心實驗室提供，溶血素由浙江省玉環(huán)縣南方試劑廠生產，小牛血清由杭州四季青有限公司生產，細胞培養(yǎng)液RPMI1640由Hyclome公司生產?！ ?.3竹蓀提取液竹蓀干品由貴州省野生資源開發(fā)保護研究中心生產。準確稱取竹蓀干品50g加500ml雙蒸水浸泡3h，制成勻漿，煮沸30min后用200目濾篩過濾，將濾液濃縮至200ml，所得竹蓀提取液濃度為0.25g/ml，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩！ ?．4動物及分組健康昆明種小鼠180只，
3、雌雄各半，體重28～32g，由貴陽醫(yī)學院實驗動物中心提供。平均分為3批，每批60只，每批隨機分為6組，每組10只；每批分組及劑量均相同。正常對照組，竹蓀高劑量、低劑量組（10g/kg、5g/kg），砷中毒模型組(As2O35mg/kg)，竹蓀治療高劑量和低劑量組（竹蓀10g/kg、5g/kg）。砷中毒模型組和竹蓀治療組用As2O3按5mg/kg標準造模，1次/d，連續(xù)7d；竹蓀治療組在造模的每天下午給竹蓀治療，灌胃量0.02ml/g?！ ?.5實驗相關試劑的配制 1.5.1綿羊紅細胞懸液(SRBC) 健康成年綿羊頸靜脈處局部消毒采血，加入等體積阿氏細胞保存液(Alsever's)
4、，4℃保存。臨用前用巴比妥緩沖液洗滌3次，2000r/min離心5min，棄上清液?！ ?.5.2巴比妥緩沖液（BBS） 準確稱取NaCl85g、巴比妥5.75g、巴比妥鈉3.75g、MgCl21.017g、無水CaCl220.066g，將巴比妥鈉溶于雙蒸餾水中，依次溶解上述試劑，雙蒸餾水定容至1000ml，高壓蒸氣滅菌20min，4℃冰箱中保存?！ ?.5.3營養(yǎng)肉湯及6%淀粉肉湯配制 牛肉浸膏0.3g、蛋白胨1.0g、NaCl0.5g，加入100ml雙蒸餾水中，微火加熱溶解，高壓蒸汽滅菌20min，4℃冰箱中保存。在營養(yǎng)肉湯中加入可溶性淀粉6g?！ ?.6觀察指標 實驗結束
5、時準確稱量實驗小鼠體重，頸椎脫臼法處死小鼠，取肝臟、腎臟、脾臟并稱重，計算臟器指數。用分光光度比色法檢測CH50活性，四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法檢測T淋巴細胞的增殖功能，顯微計數法檢測并計算巨噬細胞吞噬百分率和吞噬指數?！ ?.7統(tǒng)計方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析，實驗結果用（x±s）表示，采用方差分析及t檢驗?！ ?結果 2.1小鼠體重和臟器指數各組小鼠的體重、肝臟、脾臟和腎臟指數均無顯著性差異。見表1。表1各組上鼠小鼠體重及臟器指數比較（略）注：臟器指數=[臟器重量(g)/小鼠體重(g)]100%。 2.2CH50淋巴細胞增殖、吞噬率及吞噬指數
6、 由表2可見，與正常對照組相比，砷中毒組CH50顯著降低，差異具有顯著性（t=3.345,P=0.032<0.05）；竹蓀5g、10g組CH50與正常組比較差異無顯著性。與砷中毒組相比，竹蓀治療5g組CH50有升高趨勢，但無顯著性差異；竹蓀治療10g組CH50顯著升高，差異具有顯著性（F=4.923,P<0.01）。與正常對照組相比，砷中毒組淋巴細胞增殖功能顯著降低，差異有顯著性（t=2.150，P<0.05）；竹蓀5g、10g組淋巴細胞增殖功能與正常對照組比較差異無顯著性。竹蓀治療5g組淋巴細胞增殖功能與砷中毒組相比，差異無顯著性；竹蓀治療10g組淋巴細胞增
7、殖功能與砷中毒組比較明顯升高，差異具有顯著性（F=2.703，P<0.05）。與正常對照組相比，砷中毒組吞噬率顯著降低，差異有顯著性（t=3.170，P≦0.05）；吞噬指數顯著降低，差異有顯著性（t=4.009，P=0.01）。竹蓀5g、10g組吞噬率和吞噬指數與正常對照組比較差異無顯著性。與砷中毒組相比，竹蓀治療5g組和竹蓀治療10g組吞噬率明顯升高，差異有顯著性（F=23.005，P<0.01，P≤0.01）；吞噬指數明顯升高，差異
