免疫學(xué)檢測技術(shù)在食品安全中的應(yīng)用

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1、免疫學(xué)檢測技術(shù)在食品安全中的應(yīng)用食品安全問題在21世紀(jì)的今天已經(jīng)成為全世界關(guān)注的重大問題，對國家的經(jīng)濟(jì)發(fā)展和消費(fèi)者的身體健康產(chǎn)生了重大影響。由于食品種類豐富，食品中檢測的有毒有害物質(zhì)種類和組分繁多，需要檢測的物質(zhì)質(zhì)量極低，樣品中待檢物的濃度常為μg、ng甚至pg級，除此之外，許多檢測物除需檢測物質(zhì)本身，還涉及其衍生物和降解物測定。區(qū)別同位異構(gòu)體以及元素的價態(tài)等。因此食品檢測要求檢測方法更加準(zhǔn)確、快速、方便。1959年，Yalow和Berson將發(fā)射性同位素示蹤與免疫反應(yīng)相結(jié)合建立了發(fā)射免疫測定法，從而開創(chuàng)了免疫分析這一嶄新領(lǐng)域。現(xiàn)在，

2、免疫學(xué)檢測技術(shù)是食品檢測技術(shù)中的一個重要組成部分，特別是三大免疫技術(shù)——熒光免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)在食品檢測中得到了廣泛應(yīng)用。利用免疫學(xué)檢測技術(shù)可檢測細(xì)菌、病毒、真菌、各種毒素、寄生蟲等，還可用于蛋白質(zhì)、激素、其他生理活性物質(zhì)、藥物殘留、抗生素等的檢測，其檢測方法簡便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)，特別是單克隆抗體的發(fā)展，使得免疫檢測方法特異性更強(qiáng)，結(jié)果更準(zhǔn)確。世界糧農(nóng)組織（FAO）已向許多國家推薦免疫檢測技術(shù)，因此,人們稱免疫分析技術(shù)是21世紀(jì)最具競爭性和挑戰(zhàn)性的檢測分析技術(shù)。1．免疫熒光技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用免疫熒光分析（

3、ImmunoFluorescenceAssay,IFA）始創(chuàng)于20世紀(jì)40年代初，1942年Cons等首次報道用異硫氰酸熒光素標(biāo)記抗體，檢查小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗體，但此種熒光素標(biāo)記物的性能較差，未能推廣應(yīng)用，20世紀(jì)50年代，Riggs等合成性能較為優(yōu)良的異硫氰酸熒光素。Mashall等對熒光抗體的標(biāo)記方法又進(jìn)行了改進(jìn)，從而使得免疫熒光技術(shù)逐漸推廣應(yīng)用。1.1底物標(biāo)記熒光測定法底物標(biāo)記熒光測定法（SLFIA）使用一種酶的底物標(biāo)記待測物，底物本身無熒光，在受到相應(yīng)酶的催化時能轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒馕?，?dāng)標(biāo)記底物與抗體結(jié)合產(chǎn)生的空間位

4、阻阻礙了酶與標(biāo)記底物間的接觸，樣品中的待測物通過競爭作用使游離的酶標(biāo)結(jié)合物或熒光強(qiáng)度增加。1.2熒光偏振免疫測定法使用偏振光作為激發(fā)光時，視分子的運(yùn)動狀態(tài)，發(fā)射的熒光可能是振動方向各向隨機(jī)化的普通熒光，或是只在某一平面振動的偏振熒光（ploarizedfluorescence）在反應(yīng)液中，游離的標(biāo)記物分子體積小，在布朗運(yùn)動中轉(zhuǎn)動速度快，受偏振光照射后產(chǎn)生的熒光偏振方向被分散，不能產(chǎn)生偏振光，只發(fā)射普通熒光；與抗體結(jié)合的標(biāo)記物分子體積增大，布朗運(yùn)動速度減慢，甚至不能轉(zhuǎn)動而形成定向排列，所以受偏振光激發(fā)后能產(chǎn)生偏振熒光，樣品中的待測物的量

5、越大，偏振熒光的強(qiáng)度越高。1.3熒光淬滅免疫測定法熒光淬滅免疫測定法（FluoresecentQuenchingImmunoassay）的原理是當(dāng)熒光標(biāo)記物與抗體結(jié)合后發(fā)生熒光淬滅。熒光猝滅的機(jī)制尚不清楚，熒光淬滅可能與標(biāo)記物與抗體結(jié)合后導(dǎo)致電子振動狀態(tài)的改變有關(guān)。1.4熒光增強(qiáng)免疫測定法熒光增強(qiáng)免疫測定法（FluoresecentEnhancementImmunoassay）的原理與熒光淬滅增強(qiáng)免疫測定法相似，不同的是標(biāo)記物與抗體結(jié)合后熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。2．酶免疫檢測技術(shù)在食品檢測中的應(yīng)用酶免疫檢測技術(shù)是在20世紀(jì)60年代在熒光和組織化

6、學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，最初用酶代表熒光素標(biāo)記抗體作為生物組織中抗原的鑒定和定位。隨后發(fā)展為用于鑒定免疫擴(kuò)散及免疫電泳板上的沉淀線，到1971年，Engrall等用堿性磷酸酶標(biāo)記抗原或抗體，建立了酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），這一技術(shù)因其高度的準(zhǔn)確性、特異性、應(yīng)用范圍廣、檢測速度快以及費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，是目前食品檢測中令人矚目的有發(fā)展前途的一種新技術(shù)。酶免疫技術(shù)發(fā)展迅猛，種類繁多，酶免疫技術(shù)分為酶免疫組化技術(shù)和酶免疫測定技術(shù)，酶免疫測定技術(shù)又分為均相免疫測定和異相免疫測定技術(shù)，異相免疫測定技術(shù)又分為固相免疫測定技術(shù)和液相免疫測定

7、技術(shù)。ELISA技術(shù)把抗原抗體特異性與酶反應(yīng)的敏感性相結(jié)合，使食品在未經(jīng)分離的提取的情況下，即可進(jìn)行定性和定量分析。近年來，該技術(shù)在食品安全檢測中正逐步推廣應(yīng)用，用于細(xì)菌及其毒素、真菌及其毒素、病毒、寄生蟲的檢測，LyerMS和CousinMA等人研究用間接ELISA法來檢測食品和飼料中鐮刀菌的靈敏度和特異性,可檢測出102-103cuf/mL的含量。王彩云等應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法測定奶粉中的黃曲霉毒素M1，多次實(shí)驗(yàn)重復(fù)測定結(jié)果的變異系數(shù)最大為11.1%,實(shí)驗(yàn)的結(jié)果比較精確,重現(xiàn)性較好；總體平均回收率達(dá)92.5%。還用于蛋白質(zhì)、激素、農(nóng)業(yè)殘

8、留、獸藥殘留和抗生素及食品成分和劣質(zhì)食品的檢測分析。1993年,王勇等建立了測定三唑酮的ELISA方法,應(yīng)用于黃瓜、梨等食品的檢測,其最低檢出限為40ng/g,回收率為92.44%-98.18%,與用氣相色譜檢測的結(jié)果吻