免疫學檢測技術(shù)在食品安全中的應用

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1、免疫學檢測技術(shù)在食品安全中的應用楊明（甘肅農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，甘肅蘭州730070）食品安全問題在21世紀的今天已經(jīng)成為全世界關(guān)注的重大問題，對國家的經(jīng)濟發(fā)展和消費者的身體健康產(chǎn)生了重大影響。隨著我國市場經(jīng)濟的的不斷完善和發(fā)展，食品行業(yè)對外貿(mào)易與日劇增，食品的質(zhì)量與安全問題已成為影響農(nóng)業(yè)和食品工業(yè)產(chǎn)品競爭力的關(guān)鍵因素。同時，由于我國人民生活已由溫飽型食物結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)向營業(yè)健康型食物結(jié)構(gòu)，全民食品營業(yè)衛(wèi)生知識得到普及。人民的飲食消費觀念也由數(shù)量型轉(zhuǎn)向質(zhì)量型，對食品衛(wèi)生質(zhì)量標準的要求越練越高，這就對食品檢測技術(shù)提

2、出更高的要求。由于食品種類豐富，食品中檢測的有毒有害物質(zhì)種類和組分繁多，需要檢測的物質(zhì)質(zhì)量極低，樣品中待檢物的濃度常為μg、ng甚至pg級，除此之外，許多檢測物除需檢測物質(zhì)本身，還涉及其衍生物和降解物測定。區(qū)別同位異構(gòu)體以及元素的價態(tài)等。因此食品檢測要求檢測方法更加準確、快速、方便，也使得其他學科的先進技術(shù)不斷應用于食品檢測領(lǐng)域中來，由于新技術(shù)的引入，食品行業(yè)開發(fā)出了許多自動化程度和精確度很高的檢測儀器，這不僅縮短了分析時間，減少了人力誤差，也大大提高了食品分析檢測的速度、靈敏度和準確度。現(xiàn)代食品檢測技

3、術(shù)主要包括以下幾個方面：①計算機視覺技術(shù)；②現(xiàn)代儀器分析技術(shù)；③食品物性的力學、聲學和電學檢測技術(shù)；④電子傳感檢測技術(shù)；⑤生物傳感技術(shù)；⑥核酸探針檢測技術(shù)；⑦PCR基因擴增技術(shù)；⑧免疫學檢測技術(shù)。免疫學檢測技術(shù)是食品檢測技術(shù)中的一個重要組成部分，特別是三大免疫技術(shù)——熒光免疫技術(shù)、酶免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)在食品檢測中得到了廣泛應用。利用免疫學檢測技術(shù)可檢測細菌、病毒、真菌、各種毒素、寄生蟲等，還可用于蛋白質(zhì)、激素、其他生理活性物質(zhì)、藥物殘留、抗生素等的檢測，其檢測方法簡便、快速、靈敏度高、特異性強，特別

4、是單克隆抗體的發(fā)展，使得免疫檢測方法特異性更強，結(jié)果更準確。免疫分析是抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合為基礎的分析技術(shù)。1959年，Yalow和Berson將發(fā)射性同位素示蹤與免疫反應相結(jié)合建立了發(fā)射免疫測定法，從而開創(chuàng)了免疫分析這一嶄新領(lǐng)域，次后又發(fā)展了許多替代或非同位素免疫免疫分析法。1．免疫熒光技術(shù)在食品檢測中的應用免疫熒光分析（ImmunoFluorescenceAssay,IFA）始創(chuàng)于20世紀40年代初，1942年Cons等首次報道用異硫氰酸熒光素標記抗體，檢查小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌多

5、糖抗體，但此種熒光素標記物的性能較差，未能推廣應用，20世紀50年代，Riggs等合成性能較為優(yōu)良的異硫氰酸熒光素。Mashall等對熒光抗體的標記方法又進行了改進，從而使得免疫熒光技術(shù)逐漸推廣應用。1．1基本原理抗體與熒光素結(jié)合后，并不影響其與相應的抗原發(fā)生特異性反應，事先將待測抗原固定與玻璃載玻片上，滴加熒光標記抗體，若熒光標記抗體與相應的抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應，不能被緩沖液沖掉，載熒光顯微鏡下可觀察到熒光，否則熒光抗體被緩沖液沖掉，在顯微鏡下觀察不到熒光。61．1熒光免疫測定法的分類根據(jù)標記熒光產(chǎn)

6、生的方式不同分為底物標記熒光測定法、熒光偏振免疫測定法、熒光猝滅增強免疫測定法。FIA可使用均相或非均相分析方式，均相FIA應用較多。1．2．1底物標記熒光測定法底物標記熒光測定法（SLFIA）使用一種酶的底物標記待測物，底物本身無熒光，在受到相應酶的催化時能轉(zhuǎn)變?yōu)闊晒馕?，當標記底物與抗體結(jié)合產(chǎn)生的空間位阻阻礙了酶與標記底物間的接觸，樣品中的待測物通過競爭作用使游離的酶標結(jié)合物或熒光強度增加。1．2．2熒光偏振免疫測定法使用偏振光作為激發(fā)光時，視分子的運動狀態(tài)，發(fā)射的熒光可能是振動方向各向隨機化的普通熒

7、光，或是只在某一平面振動的偏振熒光（ploarizedfluorescence）在反應液中，游離的標記物分子體積小，在布朗運動中轉(zhuǎn)動速度快，受偏振光照射后產(chǎn)生的熒光偏振方向被分散，不能產(chǎn)生偏振光，只發(fā)射普通熒光；與抗體結(jié)合的標記物分子體積增大，布朗運動速度減慢，甚至不能轉(zhuǎn)動而形成定向排列，所以受偏振光激發(fā)后能產(chǎn)生偏振熒光，樣品中的待測物的量越大，偏振熒光的強度越高。1．2．3熒光淬滅免疫測定法熒光淬滅免疫測定法（FluoresecentQuenchingImmunoassay）的原理是當熒光標記物與抗體

8、結(jié)合后發(fā)生熒光淬滅。熒光猝滅的機制尚不清楚，熒光淬滅可能與標記物與抗體結(jié)合后導致電子振動狀態(tài)的改變有關(guān)。1．2．4熒光增強免疫測定法熒光增強免疫測定法（FluoresecentEnhancementImmunoassay）的原理與熒光淬滅增強免疫測定法相似，不同的是標記物與抗體結(jié)合后熒光強度增強。2酶免疫檢測技術(shù)在食品檢測中的應用酶免疫檢測技術(shù)是在20世紀60年代在熒光和組織化學的基礎上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，最初用酶代表熒光素標記抗體作為生