hplc法測(cè)定血漿中奧美拉唑及其人體藥動(dòng)學(xué)探究

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1、HPLC法測(cè)定血漿中奧美拉唑及其人體藥動(dòng)學(xué)探究【摘要】目的建立測(cè)定人血漿中奧美拉唑的HPLC-UV法,測(cè)定健康志愿者口服奧美拉唑腸溶膠囊20mg后的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),并評(píng)價(jià)其與參比制劑的生物等效性。方法以乙醚提取血漿樣品中的奧美拉唑,進(jìn)行HPLC分析,20名健康志愿者交叉口服奧美拉唑腸溶膠囊試驗(yàn)和參比制劑20mg,用HPLC法測(cè)定血藥濃度,計(jì)算主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)及相對(duì)生物利用度,以判斷其生物等效性。結(jié)果在3.924～1962ng/ml范圍內(nèi)奧美拉唑與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值與濃度呈良好的線性關(guān)系,以AUC0-12計(jì)算的供試制劑相對(duì)生物利用度為(99.4±13.8)%,受試奧美

2、拉唑腸溶膠囊的相對(duì)生物利用度(99.4±13.8)%。結(jié)論本文所建立的HPLC分析方法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便,臨床實(shí)驗(yàn)的藥動(dòng)學(xué)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明兩種奧美拉唑膠囊生物等效?！娟P(guān)鍵詞】奧美拉唑;藥代動(dòng)力學(xué);高效液相色譜法本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定血漿中奧美拉唑的濃度觀察中國(guó)健康志愿者口服浙江雙偉制藥有限公司仿制的奧美拉唑腸溶膠囊(受試制劑)后的血藥濃度經(jīng)時(shí)過(guò)程,估算其相應(yīng)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù),并以阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)的奧美拉唑腸溶膠囊(洛賽克)為參比制劑,估算受試制劑的相對(duì)生物利用度,為臨床用藥提供參考。91實(shí)驗(yàn)材料1.1儀器Agilent1100液相色譜儀,含:雙高壓泵,自動(dòng)進(jìn)樣器(帶溫控系

3、統(tǒng)),柱溫箱,紫外檢測(cè)器。色譜工作站:AgilentChemstation(A.10.02)。TGL-16B高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);旋渦振蕩混和器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)。1.2藥品和試劑奧美拉唑?qū)φ掌酚烧憬∷幤窓z定所標(biāo)化,含量99.7%;尼美舒利對(duì)照品由浙江雙偉制藥有限公司提供,含量99.6%。奧美拉唑腸溶膠囊(浙江雙偉制藥有限公司,批號(hào)040320,20mg/粒,受試制劑)。奧美拉唑腸溶膠囊(洛塞克)(阿斯利康制藥有限公司,批號(hào)0411005,20mg/粒,參比制劑)。甲醇(色譜純,德國(guó)Merck公司);乙酸銨、冰乙酸、三乙胺為分析純;水為去離子純凈水

4、。2實(shí)驗(yàn)方法2.1色譜條件色譜柱:LichrospherODS(25cm×4.6mm,淮陰漢邦科技有限公司);流動(dòng)相:水(1%的冰醋酸+1%三乙胺)-甲醇(37?∶?63,V/V),流速:1.0ml/min,柱溫:30℃,進(jìn)樣器控制溫度:5℃,檢測(cè)波長(zhǎng):302nm;進(jìn)樣量:10l。2.2血漿樣品的處理于10ml離心管中精密加入內(nèi)標(biāo)溶液(10.52μg/ml尼美舒利甲醇溶液)50μl,以氮?dú)饬鞔蹈?精密加入血漿樣品1ml,旋渦3秒混勻,加入69ml乙醚,渦旋4min,于4000r/min離心10min,吸取有機(jī)相轉(zhuǎn)移至另一10ml玻璃離心管中,于室溫中氮?dú)饬鞔蹈?加入

5、流動(dòng)相100μl溶解殘?jiān)?于16000r/min離心2min,吸取上清液轉(zhuǎn)移至自動(dòng)進(jìn)樣器樣品管中,進(jìn)行HPLC分析。2.3數(shù)據(jù)分析將所得血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后,用最小二乘法對(duì)尾段相回歸計(jì)算消除速率常數(shù)k,C?max?及T?max?均為實(shí)測(cè)值;消除半衰期(t?1/2?)、曲線下面積(AUC)分別按下列各式估算:t?1/2?=0.693/k,AUC?0-96?=∑Ci+C?i-1?)•(ti-t｝)/2,AUC?0-∞?=AUC?0-96?+C?96?/k,其中C96為最后取樣點(diǎn)濃度,k為末端消除速率常數(shù)。所得參數(shù)(T?max?、C?max?、A

6、UC?0-12?、AUC?0-∞?)用交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方差分析,其中C?max?、AUC?0-12?、AUC?0-∞?經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后先進(jìn)行方差分析,然后進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)(顯著性水平α=0.05)。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1色譜行為及方法的專屬性在本實(shí)驗(yàn)所采用的HPLC-UV條件下,奧美拉唑出峰時(shí)間在6.6min左右,內(nèi)標(biāo)出峰時(shí)間在9.5min左右。奧美拉唑和內(nèi)標(biāo)峰形良好,無(wú)雜峰干擾測(cè)定。本方法具有較高的特異性,能準(zhǔn)確測(cè)定血漿中的奧美拉唑的濃度。93.2血漿中奧美拉唑標(biāo)準(zhǔn)曲線制備及靈敏度取10ml玻璃離心管數(shù)支,分別精密加入不同量的奧美拉唑標(biāo)準(zhǔn)液,加入空白血漿1ml,渦旋混勻,

7、配成含奧美拉唑分別為3.924、9.810、29.43、98.10、196.2、490.5、981.0、1962ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)血漿,按“2.2”項(xiàng)下操作,計(jì)算奧美拉唑峰面積As和內(nèi)標(biāo)峰面積Ai的比值f(f=As/Ai),以f值對(duì)血藥濃度(C)作權(quán)重回歸計(jì)算,得回歸方程。不同5d,每天做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,以f值的平均值對(duì)血藥濃度(C)作回歸計(jì)算,得回歸方程:f=0.0021756×C+0.0002889(權(quán)重系數(shù)w=1/C,r=0.9998),按上述條件測(cè)得奧美拉唑在血漿中的最低定量限為3.924ng/ml(S/N≈10)。3.3回收率試驗(yàn)(絕對(duì)回收率)取10ml玻