HPLC法測(cè)定人血漿中比阿培南濃度及其藥動(dòng)學(xué)探究.doc

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1、HPLC法測(cè)定人血漿中比阿培南濃度及其藥動(dòng)學(xué)探究［摘要］目的：建立人血漿中比阿培南的高效液相色譜檢測(cè)方法。方法：色譜柱為AgilentZORBAXBonus-RP(4.6mmx250mm,5pm);流動(dòng)相為甲醇和0.03%醋酸水溶液，采用梯度洗脫法；流速為1.00ml/min;檢測(cè)波長為300nm,血漿樣品處理選用&輕基口引唏乙酸為內(nèi)標(biāo)，采用硫酸鋅沉淀蛋白。結(jié)果：比阿培南在0?2~50.0pg/ml范圍內(nèi)線性良好，HPLC測(cè)定定量下限為0.2pg/ml上匕阿培南和內(nèi)標(biāo)在血漿的保留時(shí)間分別為3.9min和9.7min,出峰迅速。比阿培南濃度分別為0.5

2、、5.0和40.0pg/ml,血漿樣本回收率分別為101.8%.100.8%,100.4%:精密度試驗(yàn)日內(nèi)和日間RSD均小于15%，穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明血漿樣品在樣品處理過程中較穩(wěn)定(RSD2.1.5給藥方法臨床上本品采用的給藥方式為靜脈滴注，故本試驗(yàn)采用將注射用比阿培南，并用100ml氯化鈉注射液稀釋，靜脈滴注，滴注時(shí)間為1.0ho根據(jù)說明書,注射用比阿培南的正常臨床治療劑量為靜脈滴注，一次300mg,12h一次。故本試驗(yàn)采用低劑量組單次靜脈滴注150mg;中劑量組單次靜脈滴注300mg,高劑量組單次靜脈滴注600mg。多次給藥，每次300mg,每日

3、2次。2.1.6樣品采集2.1.6.1單次給藥受試者于試驗(yàn)前1周和試驗(yàn)期內(nèi)均勿飲用酒類和咖啡類飲料，并在試驗(yàn)開始前一天進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)病房，晚上統(tǒng)一清淡飲食。受試者給藥間隔依取血速度而定，通常間隔5mino于給藥前Oh、開始給藥后15.0、30.0、45.0、60.0min，給藥結(jié)束后0.5、1.0、1.5、2.0、25、3.0、4.0、6.0h取血；受試者取血順序同給藥順序。受試者服藥后應(yīng)避免劇烈運(yùn)動(dòng)，亦不得長時(shí)間臥床。2.1.6.2多次給藥中劑量組10名健康受試者在單次給藥結(jié)束后，繼續(xù)進(jìn)行多次給藥，給藥劑量為300mg/次（藥液稀釋方法同單次給藥

4、），每日2次，連續(xù)給藥5d,每次靜脈滴注時(shí)間均為1h（第5天只給藥一次b于第2、3、4、5天早給藥前及第5天開始給藥后15.0.30.0.45.0、60.0min，給藥結(jié)束后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0h前臂靜脈取血，每人4ml,置于肝素試管中，分取血漿,于?209保存待測(cè)。受試者服藥后應(yīng)避免劇烈運(yùn)動(dòng)，亦不得長時(shí)間臥床。多次給藥后3d對(duì)受試者進(jìn)行體檢復(fù)查。2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.2.1方法專屬性在本實(shí)驗(yàn)所采用的色譜條件下，注射用比阿培南的保留時(shí)間為3.9min左右，內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間為9.7min左右。注射用比阿培南和內(nèi)

5、標(biāo)峰形良好，無雜峰干擾測(cè)定。提示本方法具有較高的特異性，能準(zhǔn)確測(cè)定血漿中的注射用比阿培南的濃度，靈敏度較高。見圖1o2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍>z<取1.5ml塑料離心管數(shù)支，量取空白血漿200pl,置于離心管中，分別精密加入不同濃度的的比阿培南標(biāo)準(zhǔn)液，旋渦混勻，配成含比阿培南的濃度分別為0.2,0.5、1.0.3.0、10.0,20.0,50.0pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，各血漿含0.1mg/ml內(nèi)標(biāo)20pl,按“24.3”項(xiàng)下血漿樣品的處理方法操作，制備一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并同時(shí)做空白樣品，進(jìn)行HPLC-UV分析。記錄色譜圖，計(jì)算比阿培南的峰面積As和

6、內(nèi)標(biāo)峰面積Ai的比值f（f二As/Aib以峰面積比值f對(duì)血藥濃度C作權(quán)重回歸計(jì)算，得回歸方程:f=0.0019+0.1638C（權(quán)重系數(shù)w=1/C）,r=0.9990，按上述條件測(cè)得比阿培南在血漿中的定量下限為0.2pg/mlo2.2.3精密度與準(zhǔn)確度取1.5ml塑料離心管數(shù)支，按22.2”血漿中比阿培南標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法制備含比阿培南濃度分別為0.5、5.0、40.0pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿（每個(gè)濃度做5份樣品）及一條隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，按“21.3”項(xiàng)下血漿樣品的處理方法操作。每天做一批及一條隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，連續(xù)做3d,共3批，每批每個(gè)濃度做5份樣品，記錄

7、色譜圖，計(jì)算比阿培南峰面積As和內(nèi)標(biāo)峰面積Ai的比值f,代入當(dāng)天的標(biāo)準(zhǔn)曲線求得實(shí)測(cè)濃度，計(jì)算批內(nèi)和批間精密度。見表1。表1血漿中比阿培南的精密度2.2.4加樣回收率試驗(yàn)取1.5ml塑料離心管數(shù)支，加入空白血漿0.2ml,旋渦混勻，配成含比阿培南的濃度分別為0.5、5.0、40.0pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，計(jì)算比阿培南加樣回收率。見表2。表2比阿培南加樣回收率試驗(yàn)（n二5）2.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取新鮮配制的比阿培南儲(chǔ)備液和49放置4d的比阿培南儲(chǔ)備液，以甲醇?水（5:95,V/V）稀釋至5pg/ml,各進(jìn)行3樣本分析，采用HPLC法測(cè)定。內(nèi)標(biāo)（5?輕基n

8、弭朵乙酸）儲(chǔ)備液穩(wěn)定性，方法同上，稀釋至10pg/ml,各進(jìn)行3樣本分析,結(jié)果表明，比阿培南和內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)溶液