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《植物生理生化指標(biāo)測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、小黑豆相關(guān)生理指標(biāo)測(cè)定1.表型變化：鮮重、株高、主根長(zhǎng)和葉面積鮮重：取處理好的植株，擦干根和葉表面水分，測(cè)量整株植物的重量，每個(gè)測(cè)6個(gè)重復(fù)。株高：取處理好的植株，測(cè)量從根和莖分隔處到植株最高點(diǎn)的高度，記錄，每個(gè)測(cè)6個(gè)重復(fù)。主根長(zhǎng)：取處理好的植株，測(cè)量從根和莖分隔處到主根最遠(yuǎn)點(diǎn)長(zhǎng)度，記錄，每個(gè)測(cè)6個(gè)重復(fù)。葉面積：取處理好的植株，選擇第二節(jié)段的葉片，測(cè)量葉面積，葉面積測(cè)量方法是測(cè)每個(gè)葉片最寬處長(zhǎng)度作為葉的長(zhǎng)，測(cè)葉片最窄處長(zhǎng)度作為葉的寬，葉片長(zhǎng)和寬的乘積即為葉表面積。每個(gè)測(cè)6個(gè)重復(fù)。2.總蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量
2、測(cè)定樣品處理：取0.5g樣品（葉片要去除葉脈、根要先用清水清洗干凈），速在液氮中凍存，在遇冷的研缽中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，將抽提液轉(zhuǎn)移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm離心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于總蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量測(cè)定?？偟鞍诇y(cè)定（Bradford法）：樣品反應(yīng)體系（800ulH2O+200ulBradford+5ul樣品），空白對(duì)照為（800ulH2O+200ulBradford）。測(cè)定后帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=32.549
3、X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，計(jì)算得出蛋白含量?？扇苄蕴菧y(cè)定：樣品反應(yīng)體系（1ml蒽酮+180ulddH2O+20ul樣品提取液）；空白對(duì)照（1ml蒽酮+180ulddH2O），測(cè)定OD625后帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）)蒽酮配方：稱取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml濃硫酸+30mlH2O）.注意：濃硫酸加入水中時(shí)，一點(diǎn)一點(diǎn)遞加，小心濺出受傷。丙二醛（MDA）測(cè)定：在酸性和高溫條件下，丙二醛可與硫代巴比妥（TBA）反應(yīng)生成紅棕色的
4、3,5,5-三甲基惡唑2,4-二酮，在532nm處有最大吸收波長(zhǎng)，但該反應(yīng)受可溶性糖的極大干擾，糖與TBA的反應(yīng)產(chǎn)物在532nm處也有吸收，但其最大吸收波長(zhǎng)在450nm處。采用雙組分分光光度法，可計(jì)算出MDA含量。MDA的計(jì)算公式為：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450.反應(yīng)體系為：400ul0.6%TBA+350ulH2O+50ul樣品，80℃水浴10min后，測(cè)OD532和OD450。對(duì)照用Tris-HCl.0.6%TBA配方：稱取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1MNaOH中，待其完全溶解后用10%T
5、CA（稱取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸餾水中，待其溶解即可）定容至100ml。H2O2測(cè)定（二甲酚橙法）：樣品反應(yīng)體系（82ul溶液A+820ul溶液B（A:B=1:10）+150ul樣品提取液），30℃水浴30min，測(cè)OD560。標(biāo)準(zhǔn)曲線為:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)溶液A（200ml）：FeSO4.7H2O0.1835g；(NH4)2SO40.0872g；H2SO4(濃硫酸18M)4.58ml，加水定容。溶液B（200ml）：二甲酚橙0.0234g；山梨醇6g，加水
6、定容到200ml1.可溶性蛋白、SOD、POD和CAT活性測(cè)定樣品處理：取0.5g樣品，速在液氮中凍存，在遇冷的研缽中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.0）（內(nèi)含有20%甘油、1mmol/LASA（抗壞血酸）、1mmol/LDTT（二硫蘇糖醇）、1mmol/LEDTA、1mmol/LGSH（還原型谷胱甘肽）、5mmol/LMgCl2）抽提，將抽提液轉(zhuǎn)移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm離心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于可溶性蛋白、SOD、POD和CAT含量測(cè)定。1mmol/L
7、的ASA配制：先配制10mmol/L的母液—稱取176.13mg的ASA，溶于100ml的Tris-HCl（pH7.0）中即可，然后稀釋10倍即可。1mmol/L的DTT配制：先配制10mmol/L的母液—稱取154.25mg的DDT溶于100ml的Tris-HCl（pH7.0）中即可，然后稀釋10倍即可。1mmol/L的EDTA配制：用30mmol/L的EDTA稀釋30倍即可。5mmol/L的MgCl2配制：稱取MgCl2.6H2O的101.5mg溶于100ml的Tris-HCl（pH7.0），即可。樣品提取液的配制（200m
8、l）：取10mmol/L的ASA母液20ml，10mmol/L的母液DTT20ml，取30mmol/L的EDTA母液7ml，稱取203mg的MgCl2.6H2O，最后再量取20ml的甘油，將最終體積定容到200ml，即可。可溶性蛋白測(cè)定（Bradford法）：樣
