液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用

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1、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用摘要：本文主要介紹了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物分析、食品安全檢測(cè)以及臨床疾病診斷等方面的研究進(jìn)展。關(guān)鍵詞：液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用；分析液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）是以質(zhì)譜儀為檢測(cè)手段，集HPLC高分離能力與MS高靈敏度和高選擇性于一體的強(qiáng)有力分離分析方法[1]。特別是近年來(lái)，隨著電噴霧、大氣壓化學(xué)電離等軟電離技術(shù)的成熟，使得其定性定量分析結(jié)果更加可靠，同時(shí)，由于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)高沸點(diǎn)、難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定化合物的分離和鑒定具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，因此，它已成為中藥制劑分析、藥代動(dòng)力學(xué)、食品安全檢測(cè)和臨床醫(yī)藥學(xué)研究等不可缺少的手段。1液相色譜-

2、質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展1977年，LC-MS開(kāi)始投放市場(chǎng)；1978年，LC-MS首次用于生物樣品中的藥物分析；1989年，LC-MS-MS取得成功；1991年，APILC-Ms用于藥物開(kāi)發(fā)；1997年，LC-MS用于藥物動(dòng)力學(xué)篩選；1999年，APIQ-TOFLC-MS-MS投放市場(chǎng)，大氣壓離子化接口的應(yīng)用，徹底改變了面貌，使其迅速成為制藥工業(yè)中應(yīng)用最廣的分析儀器[2]。2液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用2．1在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用隨著人們的生活水平日益提高,對(duì)食品的營(yíng)養(yǎng)性、保健性和安全性的關(guān)注均趨于理性化、科學(xué)化。國(guó)家對(duì)食品的監(jiān)管也愈加重視起來(lái)，因此食品監(jiān)督部門(mén)在食品檢測(cè)中應(yīng)用了一種

3、準(zhǔn)確的分析手段—高效液相色譜法(HPLC)。近幾年發(fā)展起來(lái)的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS),集液相色譜對(duì)復(fù)雜基體化合物的高分離能力和質(zhì)譜獨(dú)特的選擇性、靈敏度、相對(duì)分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)信息于一體而廣泛應(yīng)用于食品檢測(cè)方面,為食品工業(yè)中原材料篩選、生產(chǎn)過(guò)程中質(zhì)量控制、成品質(zhì)量檢測(cè)等提供了有效的分析檢測(cè)手段[3]。目前，LC-MS主要檢測(cè)食品中農(nóng)獸藥的殘留、食品中違禁物質(zhì)和有害添加劑的檢測(cè)、保健品中功效成分的檢測(cè)等。該技術(shù)在食品分析檢驗(yàn)方面具有十分廣闊的前景。2．1．1食品中農(nóng)獸藥殘留的檢測(cè)食品及農(nóng)產(chǎn)品的殘留分析對(duì)靈敏度、重現(xiàn)性與選擇性的要求非常高,常常需要在復(fù)雜的基質(zhì)中檢測(cè)p

4、pb級(jí)甚至更低濃度水平的痕量殘留物質(zhì)。要達(dá)到以上要求，除了良好的樣品前處理之外，還需要選擇高性能、高靈敏度的LC-MS系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)分析。李波、鄧曉軍等[4]建立了用LC-MS測(cè)定植物、動(dòng)物肉類(lèi)、水產(chǎn)品等產(chǎn)品中草甘膦（PMG）及其代謝物氨甲基磷酸（AMPA）殘留量的方法。采用SupelcoDiscoveryC18柱（150mm×2.1mm,5μm）流動(dòng)相A：0.1%甲醇-乙腈；B：5mmolL-1醋酸銨-0.1%甲酸采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)所確定的定性離子對(duì)其進(jìn)行定性,同位素內(nèi)標(biāo)法定量。此方法的回收率和精密度符合殘留檢測(cè)要求。2．1．2食品中違禁物質(zhì)和有害添加劑的檢測(cè)食品中添加劑的含量

5、過(guò)高會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生不同程度的危害,甚至威脅人的生命安全,所以有必要建立一套能夠快速鑒定并且準(zhǔn)確定量食品中有害添加劑和違禁藥物的方法。對(duì)它們的測(cè)定有分光光度法、毛細(xì)管電泳法以及氣相色譜法等，但LC-MS由于具有只需對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單預(yù)處理,適用于含量少、不宜分離得到或在分離過(guò)程中容易發(fā)生變化或損失的成分的特點(diǎn)，在對(duì)食品中違禁物質(zhì)和有害添加劑的分析研究中得到了廣泛的應(yīng)用[5]。黃芳,黃曉蘭等[6]建立了食品中三聚氰胺的高效液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定方法，用KromasilC18柱，采用正離子模式的電噴霧質(zhì)譜檢測(cè),線性范圍為0.01-0.5mg/L，檢出限為0.01mg/L，回收率為80%-99%

6、。2．1．3保健品中功效成分的檢測(cè)我國(guó)保健食品功效成分的測(cè)定方法主要有HPLC、TLC、GC、比色法等，但利用這些方法測(cè)定的結(jié)果都不能確切代表功效成分,遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足檢測(cè)工作的需要[7],但LC-MS聯(lián)用技術(shù)在對(duì)保健食品功效成分進(jìn)行分析時(shí),可以同時(shí)得到化合物的保留時(shí)間、在線紫外光譜、分子量及特征結(jié)構(gòu)碎片等豐富的信息,具有高效快速、準(zhǔn)確、靈敏度高的特點(diǎn),適合保健食品中功效成分的分析。2．2在藥物分析中的應(yīng)用LC-MS由于具有其他分析方法無(wú)法比擬的分析手段，廣泛應(yīng)用于藥物分析中，本文主要介紹其在已知化合物定性分析及結(jié)構(gòu)鑒定、未知成分定性分析以及藥物代謝中的應(yīng)用。2．2．1已知化合物定

7、性分析及結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用張萍等[8]采用HPLC法測(cè)定18份細(xì)辛屬藥材、7分馬兜鈴屬藥材中馬兜鈴酸A的含量，流動(dòng)相為甲醇-水-醋酸（60:36:4），流速1.0mL/min，柱溫20。C，檢測(cè)波長(zhǎng)316nm；同時(shí)采用LC-MS法對(duì)細(xì)辛中馬兜鈴酸A進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)。結(jié)果馬兜鈴酸A的平均回收率為97.5%，RSD為1.8；色譜圖中保留時(shí)間為9.036min的色譜峰，以及從質(zhì)譜圖得到m/z為339的[M-H]-峰，確認(rèn)為馬兜鈴酸A。2．2．2未知成分定性分析中的應(yīng)用現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，柴胡中柴胡皂苷類(lèi)