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1、第二十八章食品功能性成分的測定本章要點(diǎn)低聚糖的測定方法大豆異黃酮的測定方法總皂苷的測定方法褪黑素的測定方法肉堿的測定方法免疫球蛋白IgG的測定方法EPA和DHA的測定方法超氧化物歧化酶的測定方法總谷胱甘肽(GSH)含量的測定方法10.大蒜辣素含量的測定方法11.核苷酸含量的測定方法12.糖精含量的測定方法13.牛磺酸含量的測定方法14.甘草苷含量的測定方法15.膳食纖維含量的測定方法16.枸杞子多糖含量的測定方法17.香菇多糖的測定方法18.磷脂含量的測定方法19.花生四烯酸含量的測定方法20.β-胡蘿卜素含量的測定方法21.維生素E和胡蘿卡素含量的測定方法22.微量硒含量的測定
2、方法23.有機(jī)鍺含量的測定方法24.茶多酚含量的測定方法25.兒茶素含量的測定方法低聚糖——低聚果糖和異麥芽低聚糖的測定方法(高效液相色譜法)本方法適用功能性食品中低聚糖的檢測.一,方法提要低聚糖各組分用高效液相色譜法分離并定量測定,以乙腈,水作流動相在碳水化合物分析柱上糖的分離順序是先單糖后雙糖,先低聚后多聚,以示差折射檢測器檢測.低聚糖的檢測有外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法,但由于功能性食品一般只需報(bào)告低聚糖的總量,故可用廠家提供的基料作對照樣,在相同的分離條件下以面積比值法求出樣品中低聚糖含量.二,儀器1.高效液相色譜儀:WatersHPLC,510泵,410示差折射檢測器,數(shù)據(jù)處理裝置.
3、2.超聲波振蕩器.3.微孔過濾器(濾膜0.45μm).三,試劑1.乙腈(色譜純).2.水(三蒸水并經(jīng)Milli-Q超純處理).3.低聚糖對照品:低聚糖難得純品,故可用廠家提供的基料.為對照品.低聚果糖(Fructooligosaccharide):國產(chǎn):一般含蔗果三糖(GF2),蔗果四糖(GF3),蔗果五糖(GF4).液狀基料:含量約>35%.固狀基料:含量約>50%.進(jìn)口:從蔗果三糖(GF2)至蔗果七糖(GF6)有液狀,固狀,30%～96%多種規(guī)格.異麥芽低聚糖:有液狀,固狀,一般含量>50%.4.對照樣品溶液根據(jù)保健食品所強(qiáng)化的品種,準(zhǔn)確稱取低聚果糖或異麥芽低聚糖基料分別于1
4、00mL的容量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,配成低聚果糖約5～10mg/mL或異麥芽低聚糖約5～10mg/mL的對照樣品溶液.四,測定步驟1.樣品處理膠囊,片劑,顆粒,沖劑,粉劑(不含蛋白質(zhì))的樣品用精度0.000lg的分析天平準(zhǔn)確稱取已均勻的樣品(由于低聚糖原料含量不一,樣品中的強(qiáng)化量也不同,所以樣品的稱量應(yīng)控制在使低聚糖最終的進(jìn)樣濃度約5～10mg/mL為宜),于100mL容量瓶中,加水約80mL于超聲波振蕩器中振蕩提取30min,加水至刻度,搖勻,用0.45μm濾膜過濾后直接這樣測定.奶制品(含蛋白質(zhì))的樣品準(zhǔn)確吸取50mL于小燒杯中,加25mL無水乙醇,加熱使蛋白質(zhì)沉淀,過
5、濾,濾液經(jīng)濃縮并用水定容至25mL刻度.飲料或口服液樣品準(zhǔn)確吸取一定量的樣品,加水稀釋,定容至一定體積使低聚糖的最終進(jìn)樣濃度約5～10mg/mL.果凍或布丁類樣品果凍類樣品先均勻攪碎,稱量,加適量水并加熱至60℃左右助溶.并于超聲波振蕩器中振蕩提取,然后用水稀釋至一定體積.布丁類樣品可按奶制品處理.2.色譜分離條件色譜柱:Waters碳水化合物分析柱3.9mm×300mm.柱溫:35℃.流動相:乙腈+水(75+25).流速:1～2mL/min.檢測器靈敏度:16X.進(jìn)樣量:10～25μL.3.樣品測定取樣品處理液和對照品溶液各10～25μL注入高效液相色譜儀進(jìn)行分離.以對照品峰的
6、保留時(shí)間定性,以其峰面積計(jì)算出樣液中被測物質(zhì)的含量.低聚糖的分離順序?yàn)?低聚果糖:果糖+葡萄糖,蔗糖,蔗果三糖(GF2)……蔗果七糖(GF6)異麥芽低聚糖:葡萄糖,麥芽糖,異麥芽糖,潘糖(pentose),異麥芽三糖,異麥芽四糖,異麥芽四糖以上.五,結(jié)果計(jì)算低聚糖占總糖的百分含量因?yàn)楦鹘M分均為同系物,所以可用面積歸一法計(jì)算低聚糖各組分總面積值及各組分占固形物(總糖)的百分含量.低聚果糖占總糖%=式中Sl——果糖+葡萄糖的峰面積;S2——蔗糖的峰面積;S3+……S7——蔗果三糖(GF2)……蔗果七糖(GF6)的峰面積.異麥芽低聚糖占總糖%=式中Sl——葡萄糖的峰面積;S2——麥芽糖
7、的峰面積;S3+……S7——異麥芽糖,潘糖,異麥芽三糖,異麥芽四糖,異麥芽四糖以上的峰面積.注:以上數(shù)值均可在積分儀中直接讀出.2.低聚糖在樣品中的百分含量低聚糖%=式中S——樣品中各低聚糖組分的峰面積總和;S1——對照樣品溶液中各低聚糖組分的峰面積總和;m1——對照樣品質(zhì)量(g);c——對照樣品中各低聚糖組分占固形物(總糖)實(shí)測的百分含量;①此項(xiàng)由結(jié)果計(jì)算5(1)求出.②如對照樣品為液體基料還應(yīng)乘以固形物的含量:V——樣品定容體積(mL);V1——對照樣品定容體積(mL);m—
