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1、一、制備顯微標本的切片法一石蠟包埋切片制作法這是最常用的切片法。以石蠟作為組織的填充支持介質，將整塊組織加以包埋，最后凝固成均勻一致的固態(tài)結構。用切片機制取極薄的切片。為了讓石蠟能浸入組織內部，需將組織經(jīng)過脫水等處理。過程大致如下：⑴固定：生物標本脫離機體或培養(yǎng)環(huán)境，細胞會發(fā)生自溶，腐敗分解。因此，需用固定劑處理，使蛋白質凝固停止瀕死或死后變化。凡供永久保存的標本都需經(jīng)固定處理。常用的固定劑是甲醛、乙醇等，能使蛋白質凝固。還有由幾種試劑配成的固定液，例如Carnoy固定液，由無水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更強，不含水分，可避免水溶性物質如糖原等在固定過程中損失。⑵脫水：是將組織細胞所含
2、水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），濃度遞升到100%。此過程還使組織塊進一步硬化。⑶透明：是用既能溶于純酒精又能融解石蠟的有機溶劑，將組織中的酒精取代，以便石蠟浸入。通常用二甲苯（xylene）為透明劑。⑷浸蠟：在溫箱內進行。已透明的組織塊放入加熱融解的石蠟中，讓石蠟浸透組織，作為支持介質。⑸包埋：將已浸蠟的組織塊放入熱融的包埋石蠟中，迅速冷凝，組織決便被蠟包埋。⑹切片：用切片機。常用的切片機有輪轉式、平推式的。用輪轉式的易于切出連續(xù)切片。切片厚度隨制片目的而調整。教學標本厚度多是5~6μm。⑺貼片烤干：石蠟切片在溫水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色處理。染色后用樹膠、蓋坡片
3、封固，可永久保存。二冷凍切片法冷凍切片法是借組織在低溫下，凍結變硬而達到符合切片要求。冷凍切片法需有冷凍切片機，或在普通切片上配制冷設施。恒冷切片機是高級冷凍切片設備。它有一個恒冷箱，標本致冷臺和切片機都裝在箱內。恒冷箱的作用類似冰箱，可在一定范圍內調整溫度，其結構有利于保持箱內恒定低溫，減少箱門打開時環(huán)境溫度的干擾。切片機的輪轉把手裝在箱外，便于操縱切片。冷凍切片法的優(yōu)點是：在處理得當時，它可以最大限度地保持組織的新鮮狀態(tài)。并且，由于不需經(jīng)脫水、透明、浸蠟等過程中有機溶劑的處理，及濕箱浸蠟熱的影響，甚至可不經(jīng)固定。所以能很好地保存組織細胞的各種成分和酶的活性，因此在酶的組織化學研究中常用此切
4、片法。二、顯示標本結構成分的染色法一蘇木素伊紅染色法（HE染色法）為最常用的染色法。該法應用于各種組織的染色，是組織學技術的基本方法，對任何液體固定的組織和各種包埋的切片均可使用，只是對不同包埋的切片法處理略有不同。下面簡介石蠟包埋切片的HE染色法。1、脫蠟：石蠟切片的組織內部充滿石蠟，不能使水溶性染液著色，因此在染色前必須首先用二甲苯將石蠟脫掉，共兩次。2、下行入水：將已脫蠟的標本浸入無水酒精及各級酒精，使組織逐步接近水。3、蒸餾水略洗。4、蘇木素溶液染色約5—15分鐘5、自來水洗去多余染料。6、入稀釋的鹽酸酒精溶液中分色，邊分色邊鏡檢，至核呈紅紫色，細胞質無色為合適。7、分色后用自來水或加
5、數(shù)滴氨水堿化，直至細胞核變成藍色。這一步驟也可稱為“藍化”。8、入蒸餾水洗去堿性水分。9、入70%酒精→80%酒精各5分鐘。10、入伊紅染液染色30秒至數(shù)分鐘。11、以95%酒精對伊紅分色，至胞漿，結締組織等呈桃紅色。12、上行脫水：染色后的切片，因組織內含水而不透明，不能清晰地觀察其微細結構。因此，須將組織內的水分經(jīng)各級酒精→無水酒精逐步置換，最后進入不含水份的透明劑內。13、透明：入二甲苯透明劑，二次（各數(shù)分鐘）。14、取出切片：將組織周圍多余的二甲苯擦去，滴樹膠后加蓋玻片封固。結果：細胞核藍紫色，胞漿、膠原纖維、肌纖維為桃紅色，嗜酸性顆粒為鮮紅色，彈性纖維呈明亮桃紅色。二組織化學和細胞化
6、學染色法組織化學和細胞化學，是將物理和化學的技術運用到組織標本，用顯微鏡和化學分析方法來研究組織和細胞內的化學成分，并觀察該化學成分在組織、細胞內的定位、含量及其變化規(guī)律。這些化學成分借著化學反應所產(chǎn)生的不溶性著色物質來顯示。對于某些化學成分，例如：Fe++糖原、核酸等，可以用直接或間接的化學反應產(chǎn)生著色沉淀而顯示其部位和相對含量。對于酶類，顯示它的活性，須有該種酶的底物（被該種酶作用的物質），由酶對底物的分解，直接或間接地生成著色物質而被顯示。凡是在光學顯微鏡下觀察細胞原位顯示的化學物質，稱組織化學，若用電鏡觀察細胞原位化學成分的著色部位，則稱電鏡細胞化學，下面從原理方面簡要介紹幾種常用的組
7、織化學染色技術：1、顯示琥珀酸脫氫酶（SDH）活性的硝基-BT法：（Succinatedehydrogenase）⑴酶的定位及生物學意義：琥珀酸脫氫酶是線粒體標志酶，其存在于所有有氧呼吸的細胞，和線粒體內膜緊密結合。該酶不需輔酶而自身有黃素蛋白（FP,Flavoprotein）為輔基。在組化反應中常用來反映三羧酸循環(huán)的情況。其催化過程如下：弱-單甲（紫紅色）HOOC-CH2-CH2-COOHFPH
