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1、北京理工大學(xué)珠海學(xué)院實(shí)驗(yàn)論文實(shí)驗(yàn)論文胰蛋白酶的分離純化及動力學(xué)研究學(xué)院：化工與材料學(xué)院專業(yè)：姓名：班級：生物工程學(xué)號：指導(dǎo)老師：中國·珠海二○一六年四月3北京理工大學(xué)珠海學(xué)院實(shí)驗(yàn)論文誠信承諾書本人鄭重承諾：本人承諾呈交的畢業(yè)設(shè)計《胰蛋白酶的分離純化及動力學(xué)研究》是在指導(dǎo)教師的指導(dǎo)下，獨(dú)立開展研究取得的成果，文中引用他人的觀點(diǎn)和材料，均在文后按順序列出其參考文獻(xiàn)，設(shè)計使用的數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。本人簽名：日期：年月日3北京理工大學(xué)珠海學(xué)院實(shí)驗(yàn)論文胰蛋白酶的分離純化及動力學(xué)研究摘要本實(shí)驗(yàn)通過用有機(jī)溶劑沉淀法和離心法提取胰蛋白酶的專一性抑制劑-雞卵類粘蛋白（CHOM）作為親和配基，運(yùn)用了
2、Bradford法定量測定蛋白質(zhì)濃度再利用親和層析法對胰蛋白酶進(jìn)行分離純化，然后通過用抑制劑對酶反應(yīng)速度的影響來了解酶促反應(yīng)，掌握其規(guī)律，為了最大限度地實(shí)現(xiàn)酶促反應(yīng)的高效率、尋找最有利的反應(yīng)條件以及了解酶在代謝中的作用和某些藥物的作用機(jī)理等，都需要掌握酶促反應(yīng)速度的規(guī)律。最后通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行酶純度檢驗(yàn)以及其相對分子量的測定。關(guān)鍵詞：胰蛋白酶；雞卵粘蛋白；親和層析法；米氏常數(shù)；酶促反應(yīng)動力；聚丙烯酰胺凝膠電泳V北京理工大學(xué)珠海學(xué)院實(shí)驗(yàn)論文TrypsinofisolationandpurificationanddynamicresearchAbstract This
3、experimentthroughwithorganicsolventprecipitationmethodandcentrifugalmethodextractiontrypsinofspecificsexinhibitors-chickeneggsclassstickprotein(CHOM)asAffinitydistributionbase,usinghasBradfordmethodquantitativedeterminationproteinconcentrationagainusingaffinitychromatographymethodontrypsin
4、forseparationpurification,thenthroughwithinhibitorsonenzymereactionspeedofeffecttounderstandenzymepromotingreaction,masteritslaw,tomaximumtoachievedenzymepromotingreactionofefficient,andTofindthemostfavorableconditionsandtheroleoftheenzymeinthemetabolicmechanismandeffectofcertaindrugs,need
5、stomasterthelawofspeedofenzymaticreactions.Finally,polyacrylamidegelelectrophoresisofenzymepuritytestandthedeterminationofitsmolecularweight.Keywords:trypsin;eggprotein;affinitychromatography;-Mentenconstant;enzymaticreactionforce;PolyacrylamidegelelectrophoresisV北京理工大學(xué)珠海學(xué)院實(shí)驗(yàn)論文目錄摘要IAbstrac
6、tII目錄III1前言11.1研究背景11.2胰蛋白酶簡要介紹11.3蛋白分離純化方法綜述11.3.1沉淀法11.3.1.1鹽析法11.3.1.2有機(jī)溶劑沉淀法21.3.1.3蛋白質(zhì)沉淀劑21.3.1.4聚乙二醇沉淀作用21.3.1.5選擇性沉淀法21.3.2吸附層析21.3.2.1吸附柱層析21.3.2.2薄層層析21.3.2.3聚酰胺薄膜層析21.3.3離子交換層析31.3.4凝膠過濾31.3.5親和層析3V北京理工大學(xué)珠海學(xué)院實(shí)驗(yàn)論文1.3.6聚焦層析41.3.7氣相色譜41.3.8高效液相色譜41.4胰蛋白酶研究進(jìn)展42實(shí)驗(yàn)原理52.1胰蛋白酶的親和配基-雞卵粘蛋白
7、的分離與定量52.1.1蛋白質(zhì)沉淀52.1.1.1鹽析52.1.2蛋白質(zhì)定量52.2親和層析法分離純化胰蛋白酶52.2.1親和層析法的各項(xiàng)要素52.2.2親和層析法介紹62.2.3胰蛋白酶活性測定62.3酶動力學(xué)研究72.3.1米氏方程72.3.2抑制動力學(xué)72.4聚丙烯酰氨凝膠電泳82.4.1PAGE凝膠的組成82.4.2電泳的濃縮作用82.4.3PAGE染色及干燥83實(shí)驗(yàn)材料（設(shè)備）93.1實(shí)驗(yàn)材料93.1.1實(shí)驗(yàn)原料93.1.2實(shí)驗(yàn)原料來源93.1.3凝膠配置93.1.3.1Disc-PAGE/SDS-PAG
