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《永川豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化及其降糖活性研究 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、永川豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化及其降糖活性研究郭瑞華，王和平，劉正猛，翟麗，吳少杰，段姣姣，王寶【關(guān)鍵詞】豆豉；,,胰蛋白酶抑制劑；,,分離純化；,,降糖作用 摘要：目的從豆豉中提取胰蛋白酶抑制劑，并探討其降血糖活性。方法以永川豆豉為材料，經(jīng)脫脂，酸性溶液提取，硫酸銨沉淀得到胰蛋白酶抑制劑粗提物，再經(jīng)SephadexG-75凝膠層析得到純化的胰蛋白酶抑制劑，以純化的胰蛋白酶抑制劑給糖尿病小鼠灌胃并觀察其降血糖活性。結(jié)果從豆豉里分離出的胰蛋白酶抑制劑對胰蛋白酶的抑制率為30%~40%；用抑制劑提取液給四氧嘧啶糖尿病模型小鼠連續(xù)灌胃4d，發(fā)現(xiàn)其血糖值明顯低于模型組；觀察小鼠的胰組織病理
2、切片，與糖尿病小鼠比較，灌胃后的小鼠胰組織明顯得到修復(fù)。結(jié)論豆豉提取液有較明顯的降糖作用?！ ￡P(guān)鍵詞：豆豉；胰蛋白酶抑制劑；分離純化；降糖作用 PurificationATrypsinInhibitorfromLobsterSauceProducedinYongchuanandHypoglycemicActionofResearch Abstract：ObjectiveToisolateandpurifythetrypsininhibitorfromLobstersauceandinvestigateitshypoglycemicaction.MethodsAtrypsininhi
3、bitorthelobstersauceofYongChuanbydefatting，extractionatographyonSephadexG-75，anditshypoglycemicactioninmiceesoxalylcarbamidemodel，thebloodglucoselevelsodelgroup.ConclusionThetrypsininhibitorhashypoglycemicaction. Keyicaction 蛋白酶抑制劑廣泛存在于動植物和微生物中，具有抑制蛋白酶的活性的作用，能與相應(yīng)的蛋白酶水解，參與體內(nèi)許多重要生理過程的調(diào)節(jié)。其中胰蛋白酶抑制
4、劑具有重要的藥用價值，對于急性胰腺炎、肺氣腫、出血性和敗血性休克等疾病有獨特的療效〔1〕。蛋白酶抑制劑被認為是植物天然的自我防御體系，是植物抗病基因工程的重要目的基因來源〔2〕。大豆胰蛋白酶抑制劑（STI）與其它臨床上廣泛應(yīng)用的胰蛋白酶抑制劑具有相似的性質(zhì)，但其生理活性研究還沒得到足夠的重視。和其他胰蛋白酶抑制劑相比，大豆胰蛋白酶抑制劑具有分子量較小、免疫反應(yīng)較弱、植物來源的抑制劑能避免攜帶動物病毒、原料來源廣、價格低廉等優(yōu)點，應(yīng)當?shù)玫阶銐虻闹匾?。大豆胰蛋白酶抑制劑的種類有7~10種，目前研究證明主要有兩種在動植物體內(nèi)能抑制胰蛋白酶活力：一種為鮑曼克抑制劑(BBI),是由71個氨基酸組
5、成的多肽，分子量為7975，分子內(nèi)有7個二硫鍵，另一個為庫尼茲抑制劑（KSTI），分子量約2萬，分子內(nèi)有2個二硫鍵。近年來國外報道發(fā)現(xiàn)低濃度的BBI在動物體內(nèi)對直腸癌、肝癌等多種癌癥有抑制作用；另有報道大豆中微量胰蛋白酶抑制劑對于糖尿病治療，調(diào)節(jié)胰島素失調(diào)可能有一定效果〔3〕，但未見有降血糖作用的詳盡報道。因此，對具有強抗癌活性且毒性小的胰蛋白酶抑制劑，從豆豉中分離純化，使其成為抗癌、治療糖尿病及其并發(fā)癥的新藥用于臨床，有十分積極的意義?！ ?儀器與材料 DS1高速組織搗碎機（上海標本模型廠）,KDC1042離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司），722分光光度儀（上海精密科學(xué)儀器
6、有限公司），AE240電子天平（METTLER公司）；雄性昆明種小鼠（體重18~22g），永川豆豉(市售咸豆豉)，透析袋，牛胰蛋白酶(1∶250)、BAPNA?HCl(購自上海維思科貿(mào)有限公司),Tris(成都化學(xué)試劑廠生產(chǎn))，sephadexG75(上?；瘜W(xué)試劑廠生產(chǎn))，四氧嘧啶(Alloxan，Sigma公司)，葡萄糖試劑盒GLU（氧化酶法，液體，北京北化康泰臨床試劑有限公司），肝素鈉（天津生物化學(xué)制藥廠），其它試劑均為國產(chǎn)分析純?！ ?方法與結(jié)果 2.1豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化 2.1.1豆豉胰蛋白酶抑制劑粗提物的制備大豆胰蛋白酶抑制劑的提取方法已由Kakade等人在19
7、74年提出。由于大豆胰蛋白酶抑制劑對熱酸環(huán)境相對穩(wěn)定，一般采用水浸酸提、沉淀再經(jīng)離子交換或凝膠層析純化制得。取2kg永川豆豉，于46℃恒溫干燥9h,干燥后置于干凈托盤中,把干燥豆豉粉碎、稱重，然后加入去離子水2L，于0℃提取15h。15h后于3000r/min離心6min,沉淀棄去,收集上清液。取上清液，加入正己烷〔正己烷∶上清液(1∶2)〕，靜置30min,后用1000ml的分液漏斗分離上述混合液,回收正己烷,收集棕色豆豉提取液。用稀鹽酸20
