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《永川豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化及其降糖活性研究論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、永川豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化及其降糖活性研究論文郭瑞華，王和平，劉正猛，翟麗，吳少杰，段姣姣，王寶【關(guān)鍵詞】豆豉；,,胰蛋白酶抑制劑；,,分離純化；,,降糖作用摘要：目的從豆豉中提取胰蛋白酶抑制劑，并探討其降血糖活性。方法以永川豆豉為材料.freelLobsterSauceProducedinYongchuanandHypoglycemicActionofResearchAbstract：ObjectiveToisolateandpurifythetrypsininhibitorfromLobstersauceandinvestigateitshypo
2、glycemicaction.MethodsAtrypsininhibitorthelobstersauceofYongChuanbydefatting，extractionatographyonSephadexG-75，anditshypoglycemicactioninmiceesoxalylcarbamidemodel，thebloodglucoselevelsodelgroup.ConclusionThetrypsininhibitorhashypoglycemicaction.Keyicaction蛋白酶抑制劑廣泛存在于動(dòng)植物和微生物中，具有抑制
3、蛋白酶的活性的作用，能與相應(yīng)的蛋白酶水解，參與體內(nèi)許多重要生理過程的調(diào)節(jié)。其中胰蛋白酶抑制劑具有重要的藥用價(jià)值，對于急性胰腺炎、肺氣腫、出血性和敗血性休克等疾病有獨(dú)特的療效［1］。蛋白酶抑制劑被認(rèn)為是植物天然的自我防御體系，是植物抗病基因工程的重要目的基因來源［2］。大豆胰蛋白酶抑制劑（STI）與其它臨床上廣泛應(yīng)用的胰蛋白酶抑制劑具有相似的性質(zhì)，但其生理活性研究還沒得到足夠的重視。和其他胰蛋白酶抑制劑相比，大豆胰蛋白酶抑制劑具有分子量較小、免疫反應(yīng)較弱、植物來源的抑制劑能避免攜帶動(dòng)物病毒、原料來源廣、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)當(dāng)?shù)玫阶銐虻闹匾?。大豆胰蛋白酶抑制劑?/p>
4、種類有7~10種，目前研究證明主要有兩種在動(dòng)植物體內(nèi)能抑制胰蛋白酶活力：一種為鮑曼克抑制劑(BBI),是由71個(gè)氨基酸組成的多肽，分子量為7975，分子內(nèi)有7個(gè)二硫鍵，另一個(gè)為庫尼茲抑制劑（KSTI），分子量約2萬，分子內(nèi)有2個(gè)二硫鍵。近年來國外報(bào)道發(fā)現(xiàn)低濃度的BBI在動(dòng)物體內(nèi)對直腸癌、肝癌等多種癌癥有抑制作用；另有報(bào)道大豆中微量胰蛋白酶抑制劑對于糖尿病治療，調(diào)節(jié)胰島素失調(diào)可能有一定效果［3］，但未見有降血糖作用的詳盡報(bào)道。因此，對具有強(qiáng)抗癌活性且毒性小的胰蛋白酶抑制劑，從豆豉中分離純化，使其成為抗癌、治療糖尿病及其并發(fā)癥的新藥用于臨床，有十分積極的意義。
5、1儀器與材料DS1高速組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）,KDC1042離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司），722分光光度儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司），AE240電子天平（METTLER公司）；雄性昆明種小鼠（體重18~22g），永川豆豉(市售咸豆豉)，透析袋，牛胰蛋白酶(1∶250)、BAPNAHCl(購自上海維思科貿(mào)有限公司),Tris(成都化學(xué)試劑廠生產(chǎn))，sephadexG75(上?；瘜W(xué)試劑廠生產(chǎn))，四氧嘧啶(Alloxan，Sigma公司)，葡萄糖試劑盒GLU（氧化酶法，液體，北京北化康泰臨床試劑有限公司），肝素鈉（天津生物化學(xué)制藥廠），其它試
6、劑均為國產(chǎn)分析純。2方法與結(jié)果2.1豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化2.1.1豆豉胰蛋白酶抑制劑粗提物的制備大豆胰蛋白酶抑制劑的提取方法已由Kakade等人在1974年提出。由于大豆胰蛋白酶抑制劑對熱酸環(huán)境相對穩(wěn)定，一般采用水浸酸提、沉淀再經(jīng)離子交換或凝膠層析純化制得。取2kg永川豆豉，于46℃恒溫干燥9h,干燥后置于干凈托盤中,把干燥豆豉粉碎、稱重，然后加入去離子水2L，于0℃提取15h。15h后于3000r/min離心6min,.freelin,后用1000ml的分液漏斗分離上述混合液,回收正己烷,收集棕色豆豉提取液。用稀鹽酸20%(v/v)調(diào)豆豉提取液的
7、pH約為4，于55℃水浴中保溫1h。稱取固體硫酸銨，分次少量加入于水浴的上清液里，使硫酸銨的飽和度為30%，繼續(xù)于55℃的水浴恒溫15min，離心15min（3800r/min），棄去沉淀，留上清液。在上清液里加固體硫酸銨，使硫酸銨的飽和度為55%，55℃保溫10min，再離心15min，棄去沉淀，收集上清液。再于上清液里加固體硫酸銨，使硫酸銨溶液的飽和度為70%，55℃恒溫10min，離心30min（12000r/min），棄去上清液，收集沉淀，用20ml磷酸鹽緩沖液（pH7.8）溶解沉淀,沉淀即為抑制劑粗提物［4］，于4℃保存在冰箱里。2.1.2抑制劑
8、粗提物的透析將抑制劑粗提物置于透析袋中蒸餾水充分透析7d，除去鹽分
