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《永川豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化及其降糖活性研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、永川豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化及其降糖活性研究作者：郭瑞華，王和平，劉正猛，翟麗，吳少杰，段姣姣，王寶【關(guān)鍵詞】豆豉；,,胰蛋白酶抑制劑；,,分離純化；,,降糖作用 摘要：目的從豆豉中提取胰蛋白酶抑制劑，并探討其降血糖活性。方法以永川豆豉為材料，經(jīng)脫脂，酸性溶液提取，硫酸銨沉淀得到胰蛋白酶抑制劑粗提物，再經(jīng)SephadexG-75凝膠層析得到純化的胰蛋白酶抑制劑，以純化的胰蛋白酶抑制劑給糖尿病小鼠灌胃并觀察其降血糖活性。結(jié)果從豆豉里分離出的胰蛋白酶抑制劑對胰蛋白酶的抑制率為30%~40%；用
2、抑制劑提取液給四氧嘧啶糖尿病模型小鼠連續(xù)灌胃4d，發(fā)現(xiàn)其血糖值明顯低于模型組；觀察小鼠的胰組織病理切片，與糖尿病小鼠比較，灌胃后的小鼠胰組織明顯得到修復(fù)。結(jié)論豆豉提取液有較明顯的降糖作用?！ ￡P(guān)鍵詞：豆豉；胰蛋白酶抑制劑；分離純化；降糖作用 PurificationATrypsinInhibitorfromLobsterSauceProducedinYongchuanandHypoglycemicActionofResearch Abstract：ObjectiveToisolateandp
3、urifythetrypsininhibitorfromLobstersauceandinvestigateitshypoglycemicaction.MethodsAtrypsininhibitorthelobstersauceofYongChuanbydefatting，extractionatographyonSephadexG-75，anditshypoglycemicactioninmiceesoxalylcarbamidemodel，thebloodglucoselevelsodel
4、group.ConclusionThetrypsininhibitorhashypoglycemicaction. Keyicaction 蛋白酶抑制劑廣泛存在于動植物和微生物中，具有抑制蛋白酶的活性的作用，能與相應(yīng)的蛋白酶水解，參與體內(nèi)許多重要生理過程的調(diào)節(jié)。其中胰蛋白酶抑制劑具有重要的藥用價(jià)值，對于急性胰腺炎、肺氣腫、出血性和敗血性休克等疾病有獨(dú)特的療效［1］。蛋白酶抑制劑被認(rèn)為是植物天然的自我防御體系，是植物抗病基因工程的重要目的基因來源［2］。大豆胰蛋白酶抑制劑（STI）與其它臨床上
5、廣泛應(yīng)用的胰蛋白酶抑制劑具有相似的性質(zhì)，但其生理活性研究還沒得到足夠的重視。和其他胰蛋白酶抑制劑相比，大豆胰蛋白酶抑制劑具有分子量較小、免疫反應(yīng)較弱、植物來源的抑制劑能避免攜帶動物病毒、原料來源廣、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)當(dāng)?shù)玫阶銐虻闹匾?。大豆胰蛋白酶抑制劑的種類有7~10種，目前研究證明主要有兩種在動植物體內(nèi)能抑制胰蛋白酶活力：一種為鮑曼克抑制劑(BBI),是由71個(gè)氨基酸組成的多肽，分子量為7975，分子內(nèi)有7個(gè)二硫鍵，另一個(gè)為庫尼茲抑制劑（KSTI），分子量約2萬，分子內(nèi)有2個(gè)二硫鍵。近年來國外
6、報(bào)道發(fā)現(xiàn)低濃度的BBI在動物體內(nèi)對直腸癌、肝癌等多種癌癥有抑制作用；另有報(bào)道大豆中微量胰蛋白酶抑制劑對于糖尿病治療，調(diào)節(jié)胰島素失調(diào)可能有一定效果［3］，但未見有降血糖作用的詳盡報(bào)道。因此，對具有強(qiáng)抗癌活性且毒性小的胰蛋白酶抑制劑，從豆豉中分離純化，使其成為抗癌、治療糖尿病及其并發(fā)癥的新藥用于臨床，有十分積極的意義?！ ?儀器與材料 DS1高速組織搗碎機(jī)（上海標(biāo)本模型廠）,KDC1042離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司），722分光光度儀（上海精密科學(xué)儀器有限公司），AE240電子天平（M
7、ETTLER公司）；雄性昆明種小鼠（體重18~22g），永川豆豉(市售咸豆豉)，透析袋，牛胰蛋白酶(1∶250)、BAPNA・HCl(購自上海維思科貿(mào)有限公司),Tris(成都化學(xué)試劑廠生產(chǎn))，sephadexG75(上?；瘜W(xué)試劑廠生產(chǎn))，四氧嘧啶(Alloxan，Sigma公司)，葡萄糖試劑盒GLU（氧化酶法，液體，北京北化康泰臨床試劑有限公司），肝素鈉（天津生物化學(xué)制藥廠），其它試劑均為國產(chǎn)分析純?！ ?方法與結(jié)果 2.1豆豉胰蛋白酶抑制劑的分離純化 2.1.1豆豉胰蛋白酶
8、抑制劑粗提物的制備大豆胰蛋白酶抑制劑的提取方法已由Kakade等人在1974年提出。由于大豆胰蛋白酶抑制劑對熱酸環(huán)境相對穩(wěn)定，一般采用水浸酸提、沉淀再經(jīng)離子交換或凝膠層析純化制得。取2kg永川豆豉，于46℃恒溫干燥9h,干燥后置于干凈托盤中,把干燥豆豉粉碎、稱重，然后加入去離子水2L，于0℃提取15h。15h后于3000r/min離心6min,沉淀?xiàng)壢?收集上清液。取上清液，加入正己烷［正己烷∶上清液(1∶2)］，靜置30min,后用1000ml的分液漏斗分離上述混合液,回收正己烷,收集棕色豆豉
