天然茯苓和液體發(fā)酵茯苓質量標準的研究

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1、天然茯苓和液體發(fā)酵茯苓質量標準的研究作者：李羿,萬德光,鐘世紅,李晨【摘要】液體發(fā)酵茯苓為采用現(xiàn)代發(fā)酵工程技術生產的一種新型發(fā)酵中藥。2005年版中國藥典茯苓的質量標準尚不完善。筆者在粉末顯微特征、三萜類化合物、多糖、灰分和氨基酸含量等方面,對液體發(fā)酵茯苓和天然茯苓展開研究,建立其質量標準,為其質量控制打下基礎?！娟P鍵詞】天然茯苓;液體發(fā)酵茯苓;質量標準　　【Abstract】TheliquidfermentedPoriacocosisanewtypeoffermentedtraditionalChinesemedicineproducedbymodern

2、fermentationtechnology.ThestandardofPoriacocosisnotperfectinChinesePharmacopeia(2005).Westudiedthemicroscopiccharacteristics,terpenoids,polysaccharides,ashandaminoacidscontentofnaturalPoriacocosandliquidfermentedPoriacocos.Thus,thestandardsofnaturalPoriacocosandliquidfermentedPori

3、acocoswereestablished,whichprovidedabasisforitsqualitycontrol.　　【Keywords】naturalPoriacocos;liquidfermented11Poriacocos;qualitystandard　　茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核,為利水滲濕要藥[1]。茯苓可通過野生采集、人工栽培和發(fā)酵培養(yǎng)三個途徑獲得。除野生采集獲得天然茯苓外,可采用傳統(tǒng)的茯苓栽培法(固體發(fā)酵)來生產天然茯苓[2],或采用現(xiàn)代發(fā)酵工程技術來生產液體發(fā)酵茯苓[3]。天然茯苓

4、和液體發(fā)酵茯苓由于發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵方式不同,導致天然茯苓和液體發(fā)酵茯苓(發(fā)酵中藥茯苓)的代謝途徑和代謝產物有所差異。因此,液體發(fā)酵茯苓為一種新型發(fā)酵中藥[46]。2005年版中國藥典僅在檢查項目中對茯苓水分、總灰分和酸不溶性灰分有定量要求,而對茯苓主要活性成分多糖、三萜類化合物都未有明確要求[7]，對液體發(fā)酵茯苓質量標準的制定工作尚未開展，缺乏完善的天然茯苓和液體發(fā)酵茯苓質量標準,嚴重地影響了茯苓質量的有效控制和資源的開發(fā)利用。因此,筆者在對天然茯苓和液體發(fā)酵茯苓研究的基礎上,制定了天然茯苓和液體發(fā)酵茯苓的質量標準,為茯苓相關保健食品和藥品的開發(fā)打下基礎

5、?！　?材料與方法　　1.1試驗材料11　　天然茯苓為購于成都杏林大藥房的茯苓丁。液體發(fā)酵茯苓為經發(fā)酵罐補料液體發(fā)酵5d的發(fā)酵液離心干燥后所得[8]。　　酵母浸膏、蛋白胨為Oxoid產品;苯酚(須重蒸);薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工有限公司);葡萄糖、K2HPO4、MgSO4.7H2O、鹽酸、氯仿、丁醇、乙醇、丙酮、乙醚和NaOH等試劑均采用國產分析純?！　∪珳卣袷幤?哈爾濱東聯(lián)電子技術開發(fā)有限公司);NBSBiofloⅢ型發(fā)酵罐;BeckmanJ2HS型離心機;SartoriusBP121S型電子天平;LeicaDM1000型顯微鏡;Lambd

6、a35UV/VISSpectrometer紫外分光光度儀;ZF90型暗箱式紫外透射儀(上海顧村電光儀器廠);氨基酸自動分析儀;灰分測定裝置;FW177型粉碎機。　　1.2茯苓粉末的制備　　將烘干的液體發(fā)酵茯苓和天然茯苓分別放入粉碎器中粉碎,過篩(篩子孔徑為0.17～0.25μm),烘箱中60℃烘干至恒重,裝入有塞瓶中,貼上標簽,放入干燥器內備用?！　?.3茯苓粉末的顯微鑒定　　1.3.1茯苓粉末的臨時水裝片11洗凈擦干載玻片及蓋玻片。用玻璃吸管加1滴蒸餾水于載玻片中央,用鑷子取少許制備的液體發(fā)酵茯苓和天然茯苓粉末于蒸餾水中,用解剖針攪勻,再蓋上蓋玻片,注

7、意不要產生氣泡，多余液體用小濾紙條吸干?！　?.3.2茯苓粉末的臨時水合氯醛裝片洗凈擦干載玻片及蓋玻片。用玻璃吸管加1滴水合氯醛溶液于載玻片中央,用鑷子取少許制備的液體發(fā)酵茯苓和天然茯苓粉末于液滴中,用解剖針攪勻,接著手持載玻片的一端于酒精燈上均勻加熱(注意加熱時不要使液體沸騰,以免產生大量的氣泡),然后離開酒精燈,加1滴稀甘油充分混勻,如此加熱3～5次。加蓋玻片,并將多余的封藏液用小濾紙條吸干?！　?.3.3茯苓粉末的顯微觀察觀察菌絲團塊采用水裝片;觀察菌絲采用水合氯醛透化裝片。將制備好的液體發(fā)酵茯苓或天然茯苓樣品分別置于顯微鏡下,先用低倍鏡觀察,再換用

8、高倍鏡觀察?！　?.4茯苓粉末三萜類化合物的薄層層析　　1.4.1