茯苓多糖發(fā)酵工藝的優(yōu)化

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)。JournalofAnhuiAgi．Sci．2006，34(5)：920—921責(zé)任編輯金瓊瓊責(zé)任校對(duì)金瓊瓊茯苓多糖發(fā)酵工藝的優(yōu)化李慧j，常景玲o(1．平原大學(xué)，河南新鄉(xiāng)453003；2．河南科技學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003)摘要研究了茯苓多糖發(fā)酵過(guò)程中碳源、氮源、pH值對(duì)多糖積累的影響。結(jié)果表明：葡萄糖、玉米粉、蛋白胨均有利于茵絲的生長(zhǎng)和多糖的形成，其作用大小為碳源>氮源>pH值。并通過(guò)正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定了茯苓多糖的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖4％、玉米粉4％、蛋白胨0．4％、麩皮6％、(N心)2solo．2％、峨·7塢00．05％、KH2

2、PO,0．1％。利用此培養(yǎng)基在10L發(fā)酵罐上進(jìn)行發(fā)酵，茯苓多糖含量最高可達(dá)16g／L。關(guān)鍵詞茯苓；多糖；發(fā)酵中圖分類號(hào)$567．3+2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517—66n(2006)05一0920一02stuarOnthe●卻崎m衄岫Pn，oe鯔ofPoriaCOBC05FenrtmatationUI“etal(P'mgyuanUmversity，Xinxiang，Henan453003)Al矧a-aet1heinfluenceofearbon啾es．nitrogen$OUl℃eSandpHOilaccountingpolysaccharidesinPori

3、aCOCCO—JFermentationwasstudied．‘rheresultshowedthatglu,Ⅸe，cornstarchandpeptonewereallhelpfultothegrowthofhyphaeandtheformingofpolysaccharides．r111emnkingoftheinfluenceOnfermentationw鵲asfollows：c8rbOll舢es>nitrogensources>pH．Thebestmediumforfermentationwassetbyorthogonaltest：slucme4％

4、，cornstarch4％，peptone0．4％，bran6％，(NH4)2S040．2％，MgS04。7Hz00．05％andKH2P040．1％．7IhetopproductionofPor／acD㈣polysaccharidesinfermenterof10Lcouldreach16g／L．KeywordsPoriacocco$；Polysaccharides；Fermentation茯苓是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥材，茯苓多糖是茯苓的最有效成分之一。實(shí)驗(yàn)證明，茯苓多糖能提高人體免疫機(jī)能，具有防治腫瘤等作用，市場(chǎng)需求量越來(lái)越大。發(fā)酵生產(chǎn)茯苓多糖具有周期短、成

5、本低、產(chǎn)量大等優(yōu)點(diǎn)，為進(jìn)一步獲得大量的菌絲體，提高茯苓多糖的產(chǎn)量，降低工業(yè)生產(chǎn)成本，筆者對(duì)茯苓多糖的發(fā)酵工藝進(jìn)行了深入研究。1材料與方法1．1材料1．1．1菌體。茯苓(Por／a刪)，由筆者選育保存。1．1．2試劑。苯酚、硫酸、葡萄糖、乙醇等均為國(guó)產(chǎn)試劑。1．1．3培養(yǎng)基。斜面種子培養(yǎng)基：馬鈴薯20g，葡萄糖2g，KH2P040．2％,MgS04·7H200．15％，酵母膏0．5％，瓊脂2％，pH值自然。發(fā)酵基礎(chǔ)培養(yǎng)基：KH2P040．1g，(NH4)2S040．2％，MsSO,·7H200．05％，碳源，氮源，pH值5．6。1．2方法1．2．1菌種活化。將

6、斜面種子培養(yǎng)基配制好后分裝，121℃滅菌20min，制成斜面培養(yǎng)基，每支斜面接入0．5～1．0—2菌塊，27℃培養(yǎng)72h，菌絲均勻長(zhǎng)滿斜面。1．2．2搖瓶種子。將種子培養(yǎng)基配制好后，用8層紗布封口，121℃滅菌20min，冷卻至室溫，將3～4塊0．5～1．0矗斜面菌種的表層菌絲(不帶培養(yǎng)基)接入裝液量50ml／250ml的三角瓶中，在27℃、160r／min的條件下培養(yǎng)48h。1．2．3發(fā)酵培養(yǎng)。1．2．3．1碳源實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基：氮源為(N地)2s040．2％，碳源分別為葡萄糖4％、玉米粉4％、蔗糖4％和葡萄糖4％+玉米粉4％。1．2．3．2氮源實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基：碳源

7、為葡萄糖+玉米粉，氮源硫酸銨、蛋白胨、酵母膏、麩皮、黃豆餅粉按0．2％硫酸胺含氮量折算后分別加入。1．2．3．3優(yōu)化培養(yǎng)基：在不含碳源、氮源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，按k(33)正交實(shí)驗(yàn)表加入最適碳源和氮源。1．2．3．4發(fā)酵培養(yǎng)：培養(yǎng)基配制好后，用8層紗布封口，121oC滅菌20min，冷卻至室溫，將搖瓶培養(yǎng)得到的菌種以10％的接種量轉(zhuǎn)入裝液量100ml／500ml的發(fā)酵瓶中，在27℃、160r／min的條件下培養(yǎng)至發(fā)酵終點(diǎn)，所得發(fā)酵液備用。1．2．4茯苓多糖的提取。1．2．4．1胞外多糖的提取(圖1)。發(fā)酵液墜■上清液壅§濃縮液蘭塑§沉淀物墾塑：圣竺鱉．膨侈糖圖1

8、胞外多糖的提取工藝1．2．4．2胞內(nèi)多糖的提取(圖2