抑制型電導(dǎo)和脈沖積分安培檢測-離子色譜法測定

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1、抑制型電導(dǎo)和脈沖積分安培檢測-離子色譜法測定摘要：本文采用IonPacCS18，一種弱酸型陽離子交換柱，與抑制型電導(dǎo)檢測、積分脈沖安培檢測（IPAD）和紫外檢測(UV)聯(lián)用無需衍生測定肉和奶酪中的生物胺。CS18柱無需使用高濃度酸淋洗液和有機(jī)溶劑就可以分離生物胺，且同樣可以保證洗脫相近峰如腐胺和尸胺的分離關(guān)鍵詞：生物胺；弱酸型陽離子交換柱；抑制型電導(dǎo)檢測；積分脈沖安培檢測（IPAD）；紫外檢測(UV)生物胺在人類和動(dòng)物生理學(xué)功能上扮演著非常重要的角色，與食品腐敗和安全直接相關(guān)。從常規(guī)飲食中攝入低量生物胺并不危險(xiǎn)，但是若攝入量過高則會(huì)引起低血壓（組胺、腐胺和尸胺）、高血壓（酪胺）、偏頭痛（酪胺

2、和苯乙胺）、惡心、皮疹、暈眩、心輸出量增加，以及呼吸加速。食品在被食用前為了評(píng)估其潛在的健康隱患而進(jìn)行生物胺的測定顯得至關(guān)重要。生物胺通常采用反相HPLC，UV或者熒光檢測。由于絕大多數(shù)生物胺缺少合適的發(fā)光和熒光基團(tuán)，所以需要進(jìn)行柱前或柱后衍生后才能檢測。最常用的衍生試劑包括丹磺酰氯、苯酰氯和o-苯二醛（OPA）。這些衍生步驟在耗費(fèi)時(shí)間、人力的同時(shí)還導(dǎo)致了潛在的副產(chǎn)物干擾，使得胺的測得量或高或低。本文采用IonPacCS18，一種弱酸型陽離子交換柱，與抑制型電導(dǎo)檢測、積分脈沖安培檢測（IPAD）和紫外檢測(UV)聯(lián)用無需衍生測定肉和奶酪中的生物胺。CS18柱無需使用高濃度酸淋洗液和有機(jī)溶劑就

3、可以分離生物胺，且同樣可以保證洗脫相近峰如腐胺和尸胺的分離。溫和的分離條件使得抑制型電導(dǎo)也可以檢測許多未經(jīng)衍生的生物胺。IPAD對(duì)抑制后缺少一個(gè)電荷的生物胺同樣可以檢測，此法已經(jīng)應(yīng)用于巧克力中生物胺的測定。UV則可用來確認(rèn)與其它胺或氨基酸共淋洗的弱保留芳香生物胺的存在和濃度。1實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑DionexICS-3000系統(tǒng)；Chromeleon6.7色譜控制軟件；攪拌器（家庭和工業(yè)強(qiáng)度型）；離心機(jī)（BeckmanCoulter，Brea，CA）；渦流混合器（FisherScientific）去離子水，I級(jí)純，電阻率大于等于18MΩ·cm；氫氧化鈉，50%（w/w）(FisherSc

4、ientific，SS254-1)；甲烷磺酸，99%（Dionex公司，P/N033478）1.2色譜條件柱：IonPacCS18Analytical，2×250mm(P/N062878)；IonPacCG18Guard,2×50mm(P/N062880)；淋洗液*：0–6min,3mMMSA；6–10min，3–10mM；10–22min,10–15mM；22–28min,15mM；28–35min,15–30mM；35.1–45min，30–45mM。淋洗液源：EG淋洗液發(fā)生器單元；流速：0.30mL/min；進(jìn)樣體積：5μL；溫度：40℃（下溫控室），30℃（上溫控室）；檢測方式：**

5、抑制型電導(dǎo)，CSRSULTRA(2mm),Ⅱ外接水自抑制模式，電流設(shè)定為40mA，UV-Vis檢測設(shè)置為276nm；背景電導(dǎo):0.4–0.5μS；電導(dǎo)噪音:0.2–0.3nS；系統(tǒng)反壓:~2500psi柱后加入法：檢測方式：積分脈沖安培法（IPAD），常規(guī)Au電極；柱后試劑流速：100mMNaOH，0.24mL/min；IPAD背景：40–50nC；IPAD噪音：60–70pC(沒裝抑制器)，~210pC(裝抑制器)在進(jìn)樣前需先用3mMMSA平衡柱子5min；本注解中介紹了三種不同的檢測配置：IPAD,抑制型電導(dǎo)-IPAD和UV-IPAD1.3樣品前處理取5g基本樣品到50mL離心管中，并隨

6、后加入20mL100mMMSA提取。使用渦流混合器混勻該混合物1min，在轉(zhuǎn)速6000rpm和4℃條件下離心20min。傾出上清液，用0.2μm濾頭過濾到50mL容量瓶中。往離心管中再次加入20mLMSA，重復(fù)進(jìn)行萃取。上清液過濾到容量瓶中，并用去離子水稀釋到刻度。在分析之前，提取液需要與去離子水1：1稀釋。獼猴桃和巧克力（70%可可）獼猴桃和巧克力樣品也是取5g基本樣品到50mL離心管中，并隨后加入10mL100mMMSA提取。樣品提取如同菠菜中所提及，但是無需在測定前進(jìn)行稀釋。黑巧克力和牛奶巧克力取2g基本樣品到15mL離心管中，并隨后加入4mL100mMMSA提取。使用渦流混合器混勻該

7、混合物1min，在轉(zhuǎn)速6000rpm和4℃條件下離心30min。傾出上清液，用0.2μm濾頭分別過濾到容量瓶中，用離子水1：1稀釋。2結(jié)果和討論圖1生物胺的分離和檢測(A.抑制型電導(dǎo)，B.IPAD，C.色胺使用UV檢測)圖1為生物胺的分離情況，以抑制型電導(dǎo)、積分脈沖安培和UV檢測（為串接）。多巴胺、酪胺和色胺不能通過抑制型電導(dǎo)檢測，因?yàn)樗麄冊诒灰种坪笕鄙僬姾?。因此，要檢測10種生物胺就需要配合IPAD使用。