血紅蛋白含量測(cè)定

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1、血紅蛋白含量測(cè)定2血紅蛋白生理概要　　　　血紅蛋白是紅細(xì)胞的主要成分，在正常情況下，每個(gè)紅細(xì)胞均含有一定量的血紅蛋白。血紅蛋白是由珠蛋白和亞鐵血紅素組成的結(jié)合蛋白質(zhì)。血紅蛋白除能與氧結(jié)合形成氧合血紅蛋白外，尚能與某些物質(zhì)作用形成多種血紅蛋白衍生物。它們具有特定的色澤和吸光譜，在臨床上，可用以診斷某些變性血紅蛋白血癥和血紅蛋白的定量測(cè)定。2血球分析儀器法l儀器型號(hào)：SysmexKX-21型多項(xiàng)目自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀器SysmexXE-2100型多項(xiàng)目自動(dòng)血球分析裝置l檢測(cè)原理：一、SysmexKX-21在自動(dòng)檢測(cè)法中的血紅蛋白測(cè)量以氰化正鐵血紅蛋白法或氧合血紅蛋白法

2、為主流。但這種方法血紅蛋白轉(zhuǎn)化速度慢，其處理液應(yīng)進(jìn)行妥善處理，以及環(huán)境方面的考慮，并不是一種令人滿意的測(cè)量法。無(wú)氰HGB測(cè)量法與氧合血紅蛋白法相同，其血液中的血紅蛋白轉(zhuǎn)化成氧合血紅蛋白，且不含劇毒物。另外，由于可以測(cè)量正鐵血紅蛋白，如質(zhì)控血那樣的含有正鐵血紅蛋白的血液也可正確進(jìn)行測(cè)量。二、SysmexXE-2100集中于氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法和氧化血紅蛋白測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)，不使用毒性物質(zhì)，使該方法成為自動(dòng)檢測(cè)的一個(gè)合適的方法。同時(shí)，由于該方法可以用測(cè)量氰化高鐵血紅蛋白，所以該方法也可以準(zhǔn)確的測(cè)量含有高鐵血紅蛋白的血液。l試劑：一、SysmexKX-21⑴稀釋液⑵

3、WBC/HGB用溶血?jiǎng)?％EDTA二鉀溶液二、SysmexXE-2100⑴CELLPACK（EPK）⑵SULFOLYSER（SLS）l標(biāo)本吸入量：一、SysmexKX-21:全血模式50二、SysmexXE-2100：⑴手工模式130⑵自動(dòng)進(jìn)樣器模式200l靜脈血采血方法：抽取病人靜脈血2ml，于EDTA三鉀抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K3／ML）24小時(shí)室溫保存。l操作步驟：一、SysmexKX-21⑴儀器在全血模式（WB）下⑵要在允許空白值內(nèi)：WBCRBCHGBPLT0.3109/L0.021012/L1g/L10109/L⑶檢測(cè)質(zhì)控?cái)?shù)值合

4、格。⑷標(biāo)本的測(cè)量：將待測(cè)標(biāo)本充分混均，然后將吸液管放進(jìn)待測(cè)標(biāo)本試管中并按下開始鍵。蜂鳴器“笛笛”響兩聲之后，當(dāng)LCD畫面上顯示“正在測(cè)量”狀態(tài)時(shí)可將試管取下。⑸結(jié)果顯示：標(biāo)本被吸入后儀器將進(jìn)行自動(dòng)測(cè)量，約1分鐘左右測(cè)量結(jié)束，被測(cè)標(biāo)本的結(jié)果自動(dòng)顯示出來(lái)。同時(shí)LCD畫面自動(dòng)切換至“準(zhǔn)備測(cè)量”狀態(tài)，此時(shí)可進(jìn)行下一份標(biāo)本的測(cè)量。二、SysmexXE-2100⑴當(dāng)機(jī)器經(jīng)過電源接通和一系列自檢無(wú)誤后，在機(jī)器左上放狀態(tài)欄顯示“READY”及確認(rèn)“READYLED”（準(zhǔn)備狀態(tài)燈）呈綠色時(shí)，機(jī)器進(jìn)入準(zhǔn)備測(cè)量狀態(tài)。⑵要在允許空白值內(nèi)：WBCRBCHGBPLT0.3109/L0.

5、021012/L1g/L10109/L⑶檢測(cè)質(zhì)控?cái)?shù)值合格。⑷標(biāo)本的測(cè)量：手工模式：在準(zhǔn)備測(cè)量狀態(tài)下，按下屏幕最上一行MANUAL鍵，利用數(shù)字鍵輸入標(biāo)本的編號(hào)，按ENTER鍵確認(rèn)。將待測(cè)標(biāo)本充分混均，然后將吸液管放進(jìn)待測(cè)標(biāo)本試管中并按下開始鍵。吸液管吸液完畢后聽到三聲報(bào)警聲，將試管移開。進(jìn)樣器自動(dòng)模式：在準(zhǔn)備測(cè)量狀態(tài)下，按下屏幕最上一行MANUAL鍵，利用數(shù)字鍵輸入標(biāo)本的編號(hào)，按ENTER鍵確認(rèn)。將試管加放在自動(dòng)進(jìn)樣器工作臺(tái)上。機(jī)器開始自動(dòng)混均、吸引和分析標(biāo)本。⑸結(jié)果顯示：標(biāo)本被吸入后儀器將進(jìn)行自動(dòng)測(cè)量，被測(cè)標(biāo)本的結(jié)果自動(dòng)顯示出來(lái)。同時(shí)屏幕切換至“準(zhǔn)備測(cè)量”狀

6、態(tài)，此時(shí)可進(jìn)行下一份標(biāo)本的測(cè)量。2氰化高鐵血紅蛋白測(cè)定法l檢測(cè)原理：血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，再與氰結(jié)合成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白，在規(guī)定的波長(zhǎng)和液層厚度的條件下，具有一定的吸光系數(shù)，根據(jù)吸光度，即可求得細(xì)胞蛋白濃度。l試劑：氰化高鐵血紅蛋白轉(zhuǎn)化液：氰化鉀0.05g、高鐵氰化鉀0.2g、無(wú)水磷酸二氫鉀0.14g、TritonX-100（或其他非離子型表面活性劑）1.0ml、蒸餾水加至1000ml。l末梢血采集方法：⑴采血部位必須無(wú)凍瘡、炎癥、水腫、充血及循環(huán)障礙。成人以無(wú)名指為宜，半歲以上兒童手指為好，半歲以下嬰幼兒通常自拇指或足跟兩側(cè)采血

7、。⑵輕輕按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮膚待干。⑶緊控刺血部位，用采血針穿刺取血，動(dòng)作應(yīng)迅速，深度約2-3mm，稍加擠壓，以血液能流出為宜。⑷用干棉球擦去第一滴血，毛細(xì)吸管吸血120于抗凝管中混均，6小時(shí)內(nèi)測(cè)定完畢。⑸采血完畢，用干棉球壓住傷口，血止為止。l標(biāo)本吸入量：末梢血模式20l抗凝管的制備：取上述EDTA二鉀溶液10微升，加入小試管內(nèi)于70℃以下干燥備用。l操作步驟：取轉(zhuǎn)化液5ml，加末梢血20，混均后靜置5min。已校正過波長(zhǎng)和靈敏度的分光光度計(jì)，波長(zhǎng)540±1nm，光徑1.000cm，譜帶寬度＜1nm，20-25℃杯溫等條件

8、，轉(zhuǎn)化液為空白，測(cè)定其吸光度。l計(jì)算：血紅蛋白g/L