玉米種子純度ssr分子標記鑒定方法

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1、茄子雜交種種子純度SSR分子標記鑒定技術(shù)規(guī)程編制說明沈陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院2017年5月《茄子雜交種種子純度SSR分子標記鑒定技術(shù)規(guī)程》標準編制說明一、工作簡況，包括任務(wù)來源、協(xié)作單位、主要工作過程、主要起草人及其所做的工作；2016年6月沈陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院向沈陽市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提交《項目建議書》，建議編制《茄子雜交種種子純度SSR分子標記鑒定技術(shù)規(guī)程》標準。經(jīng)審查及公示，項目被列入沈陽市地方標準制修訂2016年度計劃，沈陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院為項目承擔單位。項目立項后，項目承擔單位成立了標準起草小組，落實了標準起草

2、經(jīng)費，提供了必要的工作條件。標準起草小組的成員有：劉延斌、楊雙、李俊、施驥、孫嘉興、李雪、胡穎、馬東梅、潘菊、閆玲、張健、李金鳳、宋偉、朱秋云、趙曉旭、杜野。劉延斌，技術(shù)總負責；楊雙、李俊、李金鳳、馬東梅、宋偉，標準樣品收集；潘菊、施驥、張健、朱秋云、趙曉旭、杜野，負責技術(shù)資料檢索；胡穎、孫嘉興、李雪、閆玲，負責標準技術(shù)參數(shù)確定。標準起草小組在批準立項的一個月內(nèi)制定了具體的標準起草計劃。按照計劃，2016年5月前完成資料收集、相關(guān)調(diào)研及試驗驗證；2016年6-8月編制征求意見稿；2016年9月開展書面

3、征求意見；10-12月完成意見整理、分析和處理；17年1-3月填寫地方標準征求意見匯總表；2017年4月聘請省內(nèi)農(nóng)業(yè)專家對征求意見稿進行修改；5-6月完成意見整理、分析和處理，填寫地方標準征求意見匯總表；7月送審；最后根據(jù)審查意見形成“標準報批稿”，報批。二、標準編制原則和確定地方標準主要內(nèi)容（如技術(shù)指標、參數(shù)、公式、性能要求、試驗方法、檢驗規(guī)則）的依據(jù)。地方標準修訂項目，還應(yīng)列出和原標準主要差異情況；茄子(SolanummelongenaL.)，是一種茄科（Solanceae）茄屬（Soalanum

4、L.）植物。茄果可供蔬食。根、莖、葉入藥，為收斂劑，有利尿之效，葉也可以作麻醉劑。種子為消腫藥，也用為刺激劑，但容易引起胃弱及便秘，果生食可解食菌中毒。原產(chǎn)亞洲熱帶，中國各省均有栽培。在全世界都有分布，以亞洲栽培最多，占世界總產(chǎn)量74%左右；歐洲次之，占14%左右。中國各地均有栽培，為夏季主要蔬菜之一，目前多數(shù)專家認為中國的茄子種質(zhì)資源豐富，栽培歷史悠久，品種繁多，是茄子的第二起源地或栽培馴化中心。茄子已成為我國許多省市縣的主要經(jīng)濟支柱作物。但因種子純度不高造成的減產(chǎn)從而影響經(jīng)濟效益的事件偶有發(fā)生，因

5、此種子純度檢測尤為重要。目前，我國鑒定茄子雜交種子純度主要依靠田間種植檢測法，此方法存在占地多，費時費工且受外界影響大。同工酶分析法受限于酶類的有限性，而且，所選酶的所有基因表達與酶譜存在不一致性，同時酶變異也未必都和形態(tài)變異有關(guān)，這就使有品種的雜交及親本不易區(qū)別。另外，發(fā)育階段或外界因素的影響對酶譜分析也會帶來一些困難。隨著分子生物學(xué)理論與技術(shù)的迅猛發(fā)展，DNA分子標記技術(shù)已有數(shù)十種，分子標記技術(shù)以其分析速度更快、成本更低、信息量更大等優(yōu)勢在動植物遺傳學(xué)研究上前景廣闊。SSR(SimpleSeque

6、nceRepeat，SSR）簡單重復(fù)序技術(shù)，又稱為微衛(wèi)星DNA，是一類由1～6個核苷酸為重復(fù)組成的長達幾十個核苷酸的串聯(lián)重復(fù)序列。同一類的微衛(wèi)星可分布于整個基因組的不同位置上。每個位置上重復(fù)單位的數(shù)目及重復(fù)單位序列的差異產(chǎn)生多態(tài)性，是一種較為理想的DNA標記技術(shù)。擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測多態(tài)性。擴增產(chǎn)物的多態(tài)性反映了基因組的多態(tài)性。SSR技術(shù)現(xiàn)已廣泛的應(yīng)用于生物的品種鑒定、系譜分析及進化關(guān)系的研究上。SSR技術(shù)其優(yōu)點有：①SSR引物能直接從已發(fā)表的文獻資

7、料、數(shù)據(jù)庫或查找近緣種SSR引物來獲得，也能夠使用經(jīng)典的分子生物學(xué)方法克隆，可節(jié)約大量的時間和精力；②在分子遺傳學(xué)的研究中，相對來說，SSR分子標記容易擴增，且大多都有相應(yīng)的軟件支持系統(tǒng)，使得微衛(wèi)星分析變得更加容易；③檢測手段簡單，規(guī)模小，可以進行非損傷取樣且可在無放射性的實驗室中進行；④試驗的重復(fù)性高，便于進行數(shù)據(jù)比較；⑤不同等位位點的應(yīng)用價值取決于各自的多態(tài)性程度，其多態(tài)性在研究上通常要比同工酶或異型酶更有價值；⑥一個SSR位點一般包括多個等位基因，具有高度多態(tài)性，適合用于分子遺傳學(xué)研究，而這些多

8、態(tài)性則被認為是由于精確的DNA交換或DNA聚合酶的滑動錯位所導(dǎo)致的重復(fù)單元數(shù)變化而造成的，尤其是一些特優(yōu)種的產(chǎn)生，很可能是通過產(chǎn)生新的等位基因位點出現(xiàn)的；⑦呈孟德爾共顯性遺傳模式，能夠區(qū)別純合顯性個體和雜合顯性個體，這為遺傳學(xué)研究提供了更多可供分析的信息。三、主要試驗（或驗證）的分析報告、相關(guān)技術(shù)和經(jīng)濟影響論證、預(yù)期的社會經(jīng)濟效益；1.DNA制備方法篩選采用植物DNA提取常見方法——樹脂型基因組DNA提取試劑盒提取，主要按照說明書要求操作：取單株幼葉10