神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角一氧化氮合酶各亞型的表達

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1、神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角一氧化氮合酶各亞型的表達及活性金小高羅愛林華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬同濟醫(yī)院麻醉學(xué)教研室430030摘要[目的]在神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型脊髓背角中升高的NO可以促進興奮性遞質(zhì)的釋放,因而NO被認為是一種致痛物質(zhì)。然而脊髓中的NO有時在抑制炎性反應(yīng)、降低神經(jīng)元的興奮性、促進鎮(zhèn)痛藥物的鎮(zhèn)痛作用取著重要的作用。但是對于神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠脊髓背角中神經(jīng)型(NOS1)、誘導(dǎo)型(NOS2)和內(nèi)皮型(NOS3)一氧化氮合酶的表達及活性差異尚不完全清楚,本試驗?zāi)康脑谟诒容^神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型脊髓背角三種類型NOS的mRNA表達及其活性

2、差異。[方法]選擇雌性SD大鼠(150-200g)20只,隨機分為4組,每組10只,一組為對照組,另一組制備SNI疼痛模型。術(shù)后觀測疼痛的變化,疼痛模型成功后,于術(shù)后第14日斷頭處死,分離L4-6段脊髓,-80oC儲存?zhèn)溆?。對照組和SNI疼痛模型組各取5只大鼠脊髓,使用Trizol提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄后,使用PCR技術(shù)擴增NOS1、NOS2和NOS3片段,以β-actin為內(nèi)參照,比較SNI組與對照組NOS表達的差異。對照組和SNI疼痛模型組各取5只大鼠脊髓,使用生理鹽水,冰上迅速勻漿,測定蛋白濃度,各取40μg的蛋白,使用一氧化氮合酶亞型催化活性檢測

3、試劑盒,依照組成型NOS(NOS1和NOS3)和誘導(dǎo)型NOS活性對Ca2+的依賴性不同,分別檢測組成型和誘導(dǎo)型NOS的活性。[結(jié)果]SNI疼痛模型組NOS1、NOS2的mRNA表達均高于對照組,差異具有顯著性(P<0.05),而NOS3的表達倆組之間差異并無顯著性(P>0.05)。一氧化氮合酶亞型催化活性檢測顯示組成型和誘導(dǎo)型NOS的活性均高于對照組,差異具有顯著性(P<0.05)。[討論]試驗結(jié)果顯示神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型脊髓背角中NOS1與NOS2不僅mRNA表達升高,而且催化合成NO的活性也都加強了。但是NOS1的活性受細胞內(nèi)鈣離子調(diào)節(jié),產(chǎn)生N

4、O的量以nmol計;NOS2合成后就與鈣調(diào)蛋白緊密結(jié)合,不受細胞內(nèi)鈣離子的影響,產(chǎn)生NO的量以μmol計。增加了組織內(nèi)的氧化壓力,NO被氧化生產(chǎn)ONOO-、N2O3和NO-,這些氧化產(chǎn)物具有細胞毒性作用。NOS2在神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞中都可能表達,特別是激活的膠質(zhì)細胞中,表達更豐富。在神經(jīng)病理性疼痛中星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞對疼痛的發(fā)生發(fā)展起著重要的作用,NOS2合成的NO在二者相互激活的過程中起著關(guān)鍵作用。NOS1主要在神經(jīng)元表達,在神經(jīng)病理性疼痛中所起的作用有其不確定性,一方面,神經(jīng)病理性疼痛時NOS1表達升高,合成NO增多,NO可以促進神經(jīng)興奮性遞

5、質(zhì)谷氨酸釋放增加,有助于疼痛的產(chǎn)生;另一方面,NO可以抑制谷氨酸受體,降低神經(jīng)元的興奮性,神經(jīng)元間的NO可以抑制單胺類轉(zhuǎn)運體,增加細胞間的單胺類遞質(zhì),單胺類遞質(zhì)可以抑制興奮性氨基酸的釋放,并且NO參與了嗎啡、可樂定和新斯的明在脊髓的鎮(zhèn)痛作用,抑制NOS1的活性,將降低這些藥物的鎮(zhèn)痛作用。NOS1與NOS2也存在著關(guān)聯(lián)性,研究表明NOS1或NOS3產(chǎn)生一定量的有一定的抗炎作用,包括抑制NOS2的活性。這與一定量的NO可以改變NF-κB的構(gòu)形,抑制其與DNA結(jié)合的活性有關(guān)。NOS1與NOS2在神經(jīng)病理性疼痛中的作用尚不清楚,特別是NOS1,要了解他們在疼

6、痛中作用,需要更深入的研究。

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