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《自然界中產(chǎn)淀粉酶菌株分離純化及酶活測(cè)定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、自然界中產(chǎn)淀粉酶菌株分離純化及酶活測(cè)定淀粉酶（Amylase）又稱糖化酶，是指能使淀粉和糖原水解成糊精、麥芽糖和葡萄糖的酶的總稱。淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直鏈淀粉、糖元等α-1,4-葡聚糖，水解α-1,4-糖苷鍵的酶。根據(jù)作用的方式可分為α-淀粉酶（EC3.2.1.1.）與β-淀粉酶（EC3.2.1.2.）。α-淀粉酶廣泛分布于動(dòng)物（唾液、胰臟等）、植物（麥芽、山萮菜）及微生物；β-淀粉酶與α-淀粉酶的不同點(diǎn)在于從非還原性末端逐次以麥芽糖為單位切斷α-1,4-葡聚糖鏈。主要見(jiàn)于高等植物中（大麥、小
2、麥、甘薯、大豆等），但也有報(bào)告在細(xì)菌、牛乳、霉菌中存在。淀粉酶是一種用途極廣的生物催化劑，廣泛應(yīng)用于造紙、食品、醫(yī)藥工業(yè)。如飴糖、啤酒、黃酒、葡萄糖、味精、抗生素等行業(yè)；用于高質(zhì)量的絲綢、人造棉、化學(xué)纖維退漿；制成不同品種的工業(yè)酶、醫(yī)用酶、診斷酶等；在洗滌劑工業(yè)中，作為洗滌劑酶與堿性蛋白酶、脂肪酶一起添加于洗衣粉中制成多酶洗衣粉等具有極廣泛的用途。隨著社會(huì)需求的增大，工業(yè)生產(chǎn)對(duì)淀粉酶的需求量越來(lái)越大，其在各領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，急需尋找更高酶活的產(chǎn)酶菌株滿足生產(chǎn)需要。生淀粉酶是指對(duì)不經(jīng)過(guò)蒸煮糊化的生淀粉顆粒能
3、夠表現(xiàn)出強(qiáng)水解活性的酶類。70年代由于兩次石油危機(jī)，引起各國(guó)學(xué)者從節(jié)能和有效利用天然資源出發(fā)，重視對(duì)生淀粉酶的研究。研究大致分兩個(gè)方面：一是探討對(duì)生淀粉不經(jīng)蒸煮，直接用于酒精發(fā)酵的可能性；另一則是從自然界中分離篩選能產(chǎn)生生淀粉酶的微生物，并進(jìn)而研究生淀粉酶的酶學(xué)特性及其產(chǎn)生菌的徽生物學(xué)特性[1,2]。除動(dòng)物自身的消化道可分泌一些淀粉酶外，淀粉酶的另外兩大來(lái)源是植物和微生物能產(chǎn)生生淀粉酶的微生物較多。Ueda[3,4]，Mizokami[5]，Tamiguchi[6]，Kainuma[7]先后報(bào)道了As
4、pergillusawaraori，Rbizopus.sp．，Strepiococcusboris，Bacilluscirculans，Chalaraparadoxa等菌種均有產(chǎn)淀粉酶能力。本實(shí)驗(yàn)擬從種植谷物的貧瘠土壤和平地肥沃土壤的5cm~25cm土層取土壤樣品中分離土壤微生物，篩選能產(chǎn)生淀粉酶的菌種，并進(jìn)行初步鑒定[8]。同時(shí)，擬進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化以提高菌株的酶產(chǎn)量，分離提純產(chǎn)生的淀粉酶并進(jìn)行酶活力測(cè)定，為利用該菌株進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)淀粉酶提供初步的理論依據(jù)。1.材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料-7-1.1.
5、1分離材料種植谷物的貧瘠土壤和平地肥沃土壤的5cm~25cm土層取土壤樣品。1.1.2培養(yǎng)基(1)PDA固體培養(yǎng)基[9]：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL。pH5.5~6.5之間，121℃滅菌20min。(2)平板篩選培養(yǎng)基：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，可溶性淀粉20g，瓊脂15~20g，pH自然，121℃滅菌20min。(3)發(fā)酵培養(yǎng)基[10]：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl10g，pH7.0，121℃滅菌20min。(4)LB培養(yǎng)基：蛋白胨10g，酵母膏
6、5g，NaCl10g，瓊脂20g，pH自然，121℃滅菌20min。1.1.3主要試劑配制DNS試劑[11]：酒石酸鉀鈉18.2g，溶于50mL蒸餾水中，加熱，于熱溶液中依次加入3,5-二硝基水楊酸0.03g，NaOH2.1g，苯酚0.5g，攪拌至溶，冷卻后用蒸餾水定容至100mL，貯于棕色瓶中，室溫保存。CTAB法所用主要試劑：提取緩沖液:2×CTAB提取液（2%CTAB，200mmol/LTris-HCl(pH8.0),50mmol/LEDTA(pH8.0),1.4mol/LNaCl）；10×CT
7、AB提取液(10%CTAB,0.7mol/LNaCl)；TE緩沖液:100mmol/LTris-HCl(pH8.0)，10mmol/LEDTA(pH8.0)。電泳緩沖液：取50×TAE（242gTris堿和57.1mL冰乙酸溶于100mL0.5mol/L的EDTA(pH8.0)溶液中，加去離子水至1000mL）20mL加蒸餾水至1000mL；溴化乙錠(EB)：稱取5g溴化乙錠(EthidiumBromide，EB)，溶于蒸餾水中并定容到10mL，避光保存。臨用前，用電泳緩沖液稀釋1000倍，使其最終濃
8、度達(dá)到0.5μg/mL；1.0%的凝膠：稱取瓊脂粉1.0g，加熱使之溶于100mL的電泳緩沖液，加入5μLEB，混勻。氨芐青霉素（Ampicillin）（100mg/mL）：溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10mL。分裝成小份于-20℃貯存。以50μg/mL的濃度添加于生長(zhǎng)培養(yǎng)基。大腸桿菌質(zhì)粒提取相關(guān)試劑：溶液Ⅰ：50mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris.HCl(pH8.0)，10mmol/LEDTA；溶液II：0.2mol/LNa
