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《響應(yīng)面法優(yōu)化地衣芽孢桿菌a2發(fā)酵培養(yǎng)基》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、響應(yīng)面法優(yōu)化地衣芽孢桿菌A2發(fā)酵培養(yǎng)基為了提高地衣芽孢桿菌A2（BacilluslicheniformisA2）發(fā)酵液的活菌含量，采用Hackett-Burman設(shè)計(jì)法和響應(yīng)面分析法對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化。先用Plackett-Burman設(shè)計(jì)從8種原料中篩選出對(duì)活菌含量有顯著影響的因素，再用最陡爬坡試驗(yàn)及Box-behnken設(shè)計(jì)進(jìn)一步優(yōu)化。結(jié)果表明，MgSO4·7H2O、酵母粉和尿素是影響發(fā)酵液活菌含量的顯著因素，優(yōu)化后的培養(yǎng)基為：可溶性淀粉5g／L，尿素1．29g／L，K2HPO46g／L，K
2、H2PO43g／L，MnSO4·H2O0．2g／L，MgSO4·7H2O0．41g／L，豆粕10g／L和酵母粉0．99g／L。在此條件下，發(fā)酵液中A2的活菌含量可以從優(yōu)化前的4．73×10^10CFU／mL提高到1．30×10^11CFU／mL。酵母菌的培養(yǎng)大多數(shù)酵母菌為腐生，其生活最適pH為4.5一6，常見(jiàn)于含糖分較高的環(huán)境中，例如果園土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生長(zhǎng)迅速，易于分離培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中，酵母菌比霉菌生長(zhǎng)得快。利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點(diǎn)，常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液（
3、這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)），然后在固體培養(yǎng)基上用劃線法分離之。常用的培養(yǎng)基有：(一)麥芽汁培養(yǎng)基的配制1．培養(yǎng)基成分新鮮麥芽汁，一般為10-15波林。2．配制方法(1)用水將大麥或小麥洗凈，用水浸泡6-12h，置于15℃陰涼處發(fā)芽，上蓋紗布，每日早、中、晚淋水一次，待麥芽伸長(zhǎng)至麥粒的兩倍時(shí)，讓其停止發(fā)芽，曬干或烘干，研磨成麥芽粉，貯存?zhèn)溆谩?2)取一份麥芽粉加四份水，在65℃水浴鍋中保溫3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(檢查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如無(wú)藍(lán)色出現(xiàn)
4、，即表示糖化完全)。(3)糖化液用4-6層紗布過(guò)濾，濾液如仍混濁，可用雞蛋清澄清(用一個(gè)雞蛋清，加水20m1，調(diào)勻至生泡沫，倒入糖化液中，攪拌煮沸，再過(guò)濾)。(4)用波美比重計(jì)檢測(cè)糖化液中糖濃度，將濾液用水稀釋到10-15波林，調(diào)pH至6．4。如當(dāng)?shù)赜衅【茝S，可用未經(jīng)發(fā)酵，未加酒花的新鮮麥芽汁，加水稀釋到10-15波林后使用。(5)如配固體麥芽汁培養(yǎng)基時(shí)，加入2％瓊脂，加熱融化，補(bǔ)充失水。(6)分裝、加塞、包扎。(7)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。（二)馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的配制1、培養(yǎng)基成分
5、馬鈴薯20g葡萄糖2g瓊脂1.5-2g水100ml自然pH2．配制方法(1)配制20％馬鈴薯浸汁取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000m1。80℃浸泡lh，用紗布過(guò)濾，然后補(bǔ)足失水至所需體積。100Pa滅菌20min。即成20％馬鈴薯浸汁，貯存?zhèn)溆?。?)配制時(shí)，按每100m1馬鈴薯浸汁加入2g葡萄糖，加熱煮沸后加入2g瓊脂，繼續(xù)加熱融化并補(bǔ)足失水。(3)分裝、加塞、包扎。(4)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。(三)豆芽汁葡萄糟培養(yǎng)基的配制1．培養(yǎng)基成分黃豆芽10g葡萄糖5g瓊脂1.5-
6、2g水100ml自然pH2．配制方法(1)稱新鮮黃豆芽10g，置于燒杯中，再加入100m1水，小火煮沸30min，用紗布過(guò)濾，補(bǔ)足失水，即制成10％豆芽汁。（2)配制時(shí)，按每100m110％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2g瓊脂，繼續(xù)加熱融化，補(bǔ)足失水。(3)分裝、加塞、包扎。(4)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。(四)察氏(czapck)培養(yǎng)基的配制1．培養(yǎng)基成分蔗糖3gNaN030.3gK2HPO40.1gKCl0.05gMgSO4·7H2O0.05gFeS040.001g瓊脂1.5-2
7、g蒸餾水100ml自然pH2．配制方法(1)稱量及溶化量取所需水量約2／3左右加入到燒杯中，分別稱取蔗糖、NaNO3、K2HP04、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100ml培養(yǎng)基加入1ml0.1％的FeS04溶液。（2）定容候藥品全部溶解后，將溶液倒入量筒中，加水至所需體積。（3）加瓊脂加入所需量瓊脂，加熱融化，補(bǔ)足失水。(4)分裝、加塞、包扎。(5)高壓蒸汽滅菌100Pa滅菌20min。（五）YPD培養(yǎng)基YPD或YPED，：YeastExtractPeptoneDextroseMe
8、dium(1L)，又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培養(yǎng)基，加入瓊脂的又叫酵母膏胨葡萄糖（YPD）瓊脂培養(yǎng)基，用于酵母菌的培養(yǎng)。1、配方：1%YeastExtract（酵母膏），2%Peptone（蛋白胨），2%Dextrose(glucose)（葡萄糖），若制固體培養(yǎng)基，加入2%瓊脂粉2、配制方法：（1）溶解10gYeastExtract（酵母膏）,20gPeptone（蛋白胨）于900ml水中，如制平板加入20g瓊脂粉（2）高壓121度20min（3）加入100ml10×De
