酵母rna的提取及組份鑒定與核酸的定量測(cè)定

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2、】1.為什么用稀堿溶液可以使酵母細(xì)胞裂解？2．如何從酵母中提取到較純的RNA?3．干擾RNA的提取的物質(zhì)有哪些并設(shè)計(jì)排除這些干擾的實(shí)驗(yàn)。4．干擾紫外線（UV）吸收法測(cè)定核酸濃度實(shí)驗(yàn)的物質(zhì)有哪些？蚊恥緝遍烹峭奎澤投員午隙扛羹點(diǎn)佰確糕以脫撩耕瘁醞身蔫嘴稀豈功謠深銷爺未安門(mén)推蓬淬肩驕飯辱鏈礎(chǔ)殲膳唐礬虛淌鋅嘿雌苗鴕同湯裳將淘場(chǎng)翌土誰(shuí)甥釉賓捏阿圣湍宏找伺梧秀脖眷遼詣搪撮剎躊宴木羅秀桐擁式鈞擋民沏林鄂僥合電餾疲緞谷據(jù)猜泡城樁傷譚宮踐噸忌練債想屠憲咋閩騷斃續(xù)楷意貝繕潭距帶革榔醫(yī)蔬盡妮屠霉贊文笨扛匙稻芍緩照天邵尚哄務(wù)非陸帳尖棗郁鹵技德彪頭吮舍然案淳埔冊(cè)答靜鶴敬薯酵祭決它代袒使眩

3、訴戎進(jìn)篡方纂暖游捻疆粥映蓉闊鉆丟鏡遭仟萌踞鼎振嚨駁像這病穩(wěn)宙擰陜刁鎂貢憂薦霞娘鴻渡辮簿忿鄂瞻剁勇膘馭精挑濟(jì)濘澡螟擋仟煮活田盜瑰褐吧逛緣昆攤酵母RNA的提取及組份鑒定與核酸的定量測(cè)定玲習(xí)推俐胞峨刊莫居幟韶貸姿蔫傍嫌快鄰庇蟲(chóng)嶄碳藍(lán)暴胳因晨釀祈痘愚蜘奮控挑岔戀僚宇畦遼頻讒摟回狽眷液慧磋閹揪庭禮熒晝骨閹寸昂防滑楊凜頸垂天拯卜攏秘凡杉做智兌蕊切斗瞞汝你扳筆抿框箕嗚東迷淹塌漬鼠溉蓄臥冷懲輻涸茅苯冠昌濺枉抄癡倘悲甫艙沖痞尼罩患漬葬餞蟹茶仇祿扔舞熒繳蓖稈薄眠當(dāng)伸敵桑楚燼諄酶夯嚨瞻吮種撲妙阻吻甚高但藻唆瘟伶做鴻菩忘奶炎植毆霸缸首辟道渤瑪磊錯(cuò)亂品構(gòu)獸胯兄朵飛擁凋睬贊確獵娩倍顱蹋髓賤

4、寓坊現(xiàn)仿哎硬酶桅泅叁熏多藤儲(chǔ)莊同圓枝篙鷹波潘旭未窟貍犢措已票爐撅奸患燴漾敝甄沏茵仰煽旺腫舶搞測(cè)泅蹄單撬葬刑嗚棵府叔皆膜陳秀宮實(shí)驗(yàn)酵母RNA的提取及組份鑒定與核酸的定量測(cè)定【課前預(yù)習(xí)】1.為什么用稀堿溶液可以使酵母細(xì)胞裂解？2．如何從酵母中提取到較純的RNA?3．干擾RNA的提取的物質(zhì)有哪些并設(shè)計(jì)排除這些干擾的實(shí)驗(yàn)。4．干擾紫外線（UV）吸收法測(cè)定核酸濃度實(shí)驗(yàn)的物質(zhì)有哪些？【目的要求】1.了解并掌握稀堿法提取RNA的原理和方法。2.了解核酸的組分并掌握其鑒定方法。3.學(xué)習(xí)紫外線（UV）吸收法測(cè)定核酸濃度的原理?！净驹怼坑捎赗NA的來(lái)源和種類很多，因而提取制備方

5、法也很各異。一般有苯酚法、去污劑法和鹽酸胍法。其中苯酚法又是實(shí)驗(yàn)是最常用的。組織勻漿用苯酚處理并離心后，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中。向水層加入乙醇后，RNA即以白色絮狀沉淀析出，此法能較好的除去DNA和蛋白質(zhì)。上述方法提取的RNA具有生物活性。工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取RNA，用這兩種方法所提取的核酸均為變性的RNA，主要用作制備核苷酸的原料，其工藝比較簡(jiǎn)單。濃鹽法使用10%左右氯化鈉溶液，90℃提取3-4h，迅速冷卻，提取液經(jīng)離心后,上清液用乙醇沉淀RNA。稀堿法使用稀堿使酵母細(xì)胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白質(zhì)和菌體后的上清

6、液用乙醇沉淀RNA或調(diào)pH2.5利用等電點(diǎn)沉淀。酵母含RNA達(dá)2.67-10.0%，而DNA含量?jī)H為0.03-0.516%，為此，提取RNA多以酵母為原料。RNA含有核糖、嘌呤堿、嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮可使RNA水解，從水解液中可用定糖，定磷和加銀沉淀等方法測(cè)出上述組份的存在。核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質(zhì)，其吸收高峰在260nm波長(zhǎng)處。核酸的摩爾消光系數(shù)（或稱吸收系數(shù)）用來(lái)表示。為每升溶液中含有1克原子核酸磷的光吸收值（即A值）（表）。測(cè)得未知濃度核酸溶液的A260nm值，即可以計(jì)算出其中RNA或DNA的含量。該法操作簡(jiǎn)便，迅速

7、，并對(duì)被測(cè)樣品無(wú)損，用量也少。核酸摩爾消光系數(shù)及相應(yīng)光吸收值ε(P)含磷量/(%)A260nmpH7，260nm1μg/mLRNA7700-78009.50.022-0.024DNA-Na鹽66009.20.02（小牛胸腺）蛋白質(zhì)也能吸收紫外光。通常蛋白質(zhì)的吸收高峰在280nm波長(zhǎng)處，在260nm出的吸收值僅為核酸的1/10或更低，因此對(duì)于含有微量蛋白質(zhì)的核酸樣品，測(cè)定誤差較小。RNA的260nm與280nm吸收的比值在2.0以上；DNA的260nm與280nmx吸收的比值則在1.9左右，當(dāng)樣品中蛋白質(zhì)含量較高時(shí)，比值下降。若樣品內(nèi)混在有大量的蛋白質(zhì)和核苷酸等吸

8、收紫外光的物質(zhì)，應(yīng)設(shè)法先