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1、香菇多糖對小鼠巨噬細(xì)胞的活化作用【摘要】目的探討香菇多糖（LNT）對機(jī)體的免疫系統(tǒng)刺激活性。方法（1）615純系小鼠靜脈注射LNT，測定巨噬細(xì)胞吞噬功能；（2）腫瘤壞死因子（TNF）的測定；取傳代后3～4天L615小鼠白血病細(xì)胞檢測細(xì)胞毒；（3）熒光染色和DNA電泳觀察細(xì)胞凋亡。結(jié)果LNT能夠誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞、脾細(xì)胞和胸腺細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中TNF含量顯著增加。誘導(dǎo)后的巨噬細(xì)胞上清對L615白血病細(xì)胞細(xì)胞毒活性由對照的11．4%增高到66．2％。且呈LNT劑量依賴性，作用后的白血病小鼠細(xì)胞體積
2、顯著縮小，核發(fā)生固縮，呈現(xiàn)凋亡細(xì)胞特征。結(jié)論LNT活化后的巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞有顯著的細(xì)胞毒作用，其機(jī)制與誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有著密切的關(guān)系【關(guān)鍵詞】香菇多糖巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子細(xì)胞凋亡【Abstract】ObjectiveToresearchoneofitsmechanismsmediatedbytheactivationofmacrophagesinmurinecavityinducedbylentinan（LNT）Methods（1）Observingthephagocyt
3、osisofmacrophagesinmurinecavityinducedbyLNT，（2）Measuringthetumornecrosisfactor（TNF）ofL615leukeamiamiceafterbeinginjectedbyLNT,（3）ApoptosismediatedbyTNFinmacrophagesinducedbyLNT.wasdetectedwithHochest33258fluorochromestainingandDNAelectrophoresis.Resul
4、tsTheratioandindexofphagocytosisofmacrophagesinmurinecavityinducedbylentinan（LNT）wereincreasedsignificantly.Meanwhilecontentoftumornecrosisfactor（TNF）insupernatantofmacrophagesspleniccellsandthymocytesinducedbyLNTwerehigherthanthecontrol.Thecytoxicact
5、ivationofmacrophagesupernatantinducedbyLNTonL615leukeamiacellsroseto66.2%fromthecontrol（11.4%）andexpressedadosedependeantmannerwhenL615leukeamiacellsweretreatedbythemacrophagesupernatantinducedbyLNTDNA,theapoptoticcellswerefound.ConclusionThemacrophag
6、esactivatedbyLNTshowshighcytotoxicactivationontumorcells,andoneofitsmechanismsofanti-tumorcellsistheapoptosismediatedbyTNFinmacrophagesinducedbyLNT.【Keywords】lentinan；macrophage；TNF;apptosis現(xiàn)代研究證明，香菇多糖（LNT）可調(diào)節(jié)人體內(nèi)有免疫功能的T細(xì)胞活性，可降低甲基膽蒽誘發(fā)腫瘤的能力。香菇對癌細(xì)胞有強(qiáng)烈的抑制
7、作用。從細(xì)胞凋亡（Apoptosis）的角度探討抗腫瘤途徑是目前醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞凋亡機(jī)制比較復(fù)雜，而且不單純是一個(gè)生理過程，它與很多免疫的發(fā)生發(fā)展有著重要的關(guān)系［1,2］。利用某些手段誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤目的是本課題出發(fā)點(diǎn)。我們利用LNT誘導(dǎo)活化巨噬細(xì)胞進(jìn)而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，起到抗腫瘤效果，更符合生物自身防御原則，達(dá)到扶正固本的作用。31材料與方法1.1巨噬細(xì)胞功能測定615純系小鼠（4～6周齡，中國醫(yī)科院血研所動(dòng)物中心）靜脈注射LNT［Lentinusedodes（Berk）Sin
8、g干燥子實(shí)體中提取，福建梅峰制藥廠］66.7mg/㎏體重，qd×7d，停藥第2天，腹腔注射5％雞紅細(xì)胞（CRBC）生理鹽水0.5ml／只，8～12h后收集腹腔巨噬細(xì)胞。于載玻片上37℃溫育30min，甲醇固定Giemsa－wright染液染色，油鏡觀察，計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。1．2腫瘤壞死因子（TNF）的測定收集，腹腔巨噬細(xì)胞，800g離心20min，沉淀細(xì)胞經(jīng)Hank’s液（含10%的FBS）沉淀2次。用CM調(diào)細(xì)胞濃度為5×106/ml，于24孔培養(yǎng)孔板37℃
