丹參枳術(shù)飲對(duì)stc大鼠腸道肌間神經(jīng)叢內(nèi)vip、sp表達(dá)的影響

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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)主國(guó)中醫(yī)急癥2010年10月第19卷第lo期JETCM．Oct．2010，V01．19，No．10丹參枳術(shù)飲對(duì)STC大鼠腸道肌間神經(jīng)叢內(nèi)VIP、SP表達(dá)的影響宰鄭晨果△葉樂(lè)馳金純中圖分類號(hào)：R285．5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1004—745X(2010)10—1737—02【摘要】目的建立大鼠慢傳輸型便秘(STC)的動(dòng)物模型。觀察丹參枳術(shù)飲對(duì)STC大鼠的腸道肌間神經(jīng)叢內(nèi)VIP、SP神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)的影響。方法健康成年SD大鼠30只，按照隨機(jī)化原則分為正常組10只，模型組lO只，治療組IO只

2、。正常組、模型組予生理鹽水灌胃。治療組予丹參枳術(shù)飲灌胃。15d為l療程。取大鼠大腸(盲腸至肛門上方2cm)，石蠟包埋，制作免疫組化染色。結(jié)果治療組可增加因便秘而減少的VIP、SP神經(jīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。結(jié)論丹參枳術(shù)飲可以增加STC大鼠的腸道肌間神經(jīng)叢內(nèi)VIP、SP含量?！娟P(guān)鍵詞】慢傳輸型便秘大黃丹參枳術(shù)飲VIPSP慢傳輸型便秘(slowtransitconstipation，STC)又稱結(jié)腸無(wú)力，屬腸道動(dòng)力障礙性疾病，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，現(xiàn)占慢性功能性便秘的45％。全國(guó)名中醫(yī)金定國(guó)依據(jù)發(fā)病機(jī)制，并且

3、結(jié)合自己的臨床經(jīng)驗(yàn)，應(yīng)用以丹參209，白術(shù)209，枳實(shí)209，麻仁209組成的中藥方劑丹參枳術(shù)飲治療便秘。在I臨床上取得了滿意的療效?。本實(shí)驗(yàn)用大黃粉制作出結(jié)腸慢傳輸模型，通過(guò)免疫組化來(lái)檢測(cè)rIP、SP在治療后模型鼠結(jié)腸肌間神經(jīng)叢內(nèi)的蛋白表達(dá)。研究該方藥可能的作用機(jī)制，為臨床防治STC提供有意義的理論依據(jù)。l材料與方法1．1材料SP抗體及SAGS試劑盒由武漢博士德生物工程公司提供，包括5％BSA封閉液，二抗：山羊抗兔IgG。鏈酶親和素一生物素一過(guò)氧化物酶復(fù)合物(SABC)。VIP抗體及SAGS試

4、劑盒北京中山公司提供。丹參枳術(shù)飲(組成：丹參、炒枳殼、生白術(shù)、火麻仁)由溫州醫(yī)學(xué)院附屬二院藥房提供。1．2分組與造模12J選用健康成年SD大鼠·30只，體質(zhì)量200—2509，清潔級(jí)，雌雄各半(溫州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室提供)。按照隨機(jī)化原則分為正常組10只，模型組10只，治療組10只。正常組飼以普通軟飼料。模型組、治療組飼料中添加大黃粉，起始劑量為300rag／(kg·d)，每3天加藥1次，遞增至2700rag／(kg·d)時(shí)，約半數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)粥樣便。維持此劑量直到粥樣便消失，再按300mg／(kg·d)

5、遞增，如此保持半數(shù)以上動(dòng)物有下瀉作用，飼養(yǎng)3個(gè)月，最終用量為5700mg／(kg·d)。停藥l周后，通過(guò)活性炭灌胃法測(cè)定腸道傳輸功能，以確定模型是否成功。1．3給藥所有大鼠每天給予足量食物和飲水，正常組、模型組灌胃生理鹽水，劑量為20mL／kg。治療組灌胃丹參枳術(shù)飲，劑量為249／kg生藥。各組均每日給藥1次，15d為l療程。1．4病理檢查取大鼠大腸(盲腸至肛門上方2cm)，生理鹽水沖洗干凈，放入10％中性甲醛液中固定24h，然后梯度酒精脫水，石蠟包埋。用連續(xù)橫斷面組織切片法切取厚41a,m的組

6、織塊，溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院(溫州325027)幸福州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(No．Y20072007)△通信作者·1737··實(shí)驗(yàn)研究·每張載玻片貼8個(gè)組織塊，40。C10h烘干，進(jìn)行免疫組化染色。SP、VIP免疫組織化學(xué)染色方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。1．5染色組化結(jié)果判定半定量分析標(biāo)準(zhǔn)為：所有視野未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞為(一)；有少數(shù)弱陽(yáng)性神經(jīng)元為(+)，染色呈淡黃；陽(yáng)性細(xì)胞較多見(jiàn)為(++)，染色呈棕黃；陽(yáng)性細(xì)胞多見(jiàn)為(+++)，棕褐色。彩色病理圖像分析：100倍光鏡下每張鋪片隨機(jī)選取3—5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性神

7、經(jīng)的平均面密度(面密度是指目標(biāo)面積占計(jì)場(chǎng)面積的百分比，反映陽(yáng)性神經(jīng)在鋪片標(biāo)本中的含量)。1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSSlI．5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。等級(jí)資料檢驗(yàn)方法采用秩和檢驗(yàn)，多組計(jì)量資料分析采用方差分析，數(shù)量以(面±5)表示。2結(jié)果2．I免疫組化染色見(jiàn)圖I、圖2、表l。免疫組化染色顯示肌問(wèn)神經(jīng)叢各神經(jīng)遞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)的神經(jīng)細(xì)胞呈棕黃色，細(xì)胞胞漿呈顆粒狀。模型組各神經(jīng)遞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量較正常組明顯減少(P<0．01)，而治療組則較模型組有不同程度的增加(P<0．05)。2．22．2．1圖I肌間

8、神經(jīng)叢內(nèi)VIP神經(jīng)細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)(光鏡?！?00)圖2肌問(wèn)神經(jīng)叢內(nèi)SP神經(jīng)細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)(光鏡。x100倍)免疫組化染色半定量分析結(jié)果VIP陽(yáng)性表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞半定量分析結(jié)果見(jiàn)表2。便萬(wàn)方數(shù)據(jù)·1738·表1各組大鼠VIP、SP神經(jīng)面密度比較(％，i±s)中國(guó)中醫(yī)急癥2010年10月第19卷第10期JETCM．Oct．201巫V01．19，No．．10與模型組比較．·P<0．05，··P