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《激素對(duì)誘導(dǎo)濕地松成熟胚胚性愈傷組織影響的初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)萬(wàn)方數(shù)據(jù)1期何月秋，等：激素對(duì)誘導(dǎo)濕地松成熟胚胚性愈傷組織影響的初步研究75細(xì)胞胚胎發(fā)生的再生植株，但再生頻率僅有10％；唐巍uu以濕地松未成熟合子胚在LP培養(yǎng)基上獲得了胚性愈傷組織并獲得了再生植株，獲得再生植株的頻率增加到15％。由于成熟合子胚對(duì)培養(yǎng)條件的要求更高，再生難度更大，因此濕地松成熟胚為起始材料誘導(dǎo)胚性愈傷組織則尚未見(jiàn)報(bào)道。然而以未成熟胚為材料，不但取材受到發(fā)育季節(jié)和地理環(huán)境的嚴(yán)格限制，而且增加了無(wú)菌操作的難度，大大降低了培養(yǎng)效率。由此，本研究以濕地松成熟胚為外植體材料，對(duì)其誘導(dǎo)胚性愈傷組織作了初步嘗試。1材料和方法精選濕地松種子在4℃冰箱處
2、理3—4周，取出用清水洗凈，0．1％高錳酸鉀浸泡12h，流水沖洗lh，去殼后用70％酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗3次，0．1％氯化汞消毒3—4min，無(wú)菌水沖洗數(shù)遍。用濾紙吸干，小心取出胚，置于附加不同激素的LP培養(yǎng)基上，并在21℃黑暗條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)基中另附加450mg·L。1谷氨酰胺，500mg·L-1水解酪蛋白，3％蔗糖，6．5％瓊脂。其pH值在滅菌前調(diào)到5．8，在121℃高溫、高壓下滅菌15min。2結(jié)果與分析2．1不同2，4·D、6一BA濃度對(duì)濕地松成熟胚愈傷組織的影響一般而言，松屬類(lèi)樹(shù)種誘導(dǎo)形成的胚性愈傷組織為：白色透明絲狀、黏度高、濕度大、相對(duì)疏松[
3、1引。從所選擇的9個(gè)配方中比較來(lái)看，隨著生長(zhǎng)素2，4一D濃度的增加，形成的愈傷組織質(zhì)地，逐漸由緊實(shí)變?yōu)楸容^疏松，由干燥變得濕潤(rùn)，其顏色也逐漸變?yōu)榈Ｕf(shuō)明高2，4·D濃度對(duì)誘導(dǎo)濕地松的胚性愈傷組織非常必要。本實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)出的愈傷組織一般在15d后逐漸出現(xiàn)壞死斑，但在程度上，隨2，4．D和6一BA濃度的升高有所減輕。濕地松成熟胚在培養(yǎng)基LP+2，4一D12mg·L-1+6一BA4mg·L-1上能夠誘導(dǎo)形成少量白色、透明的粘性的愈傷組織，且繼代能夠較快的增殖。這表明生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素濃度配比對(duì)促進(jìn)離體胚脫分化形成胚性愈傷組織有相當(dāng)重要的作用(參見(jiàn)表1)。表1不同2。4
4、．D和BA濃度對(duì)濕地松成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)T枷e1IIlnuenceofv州ousconcentrationsof2，4一DandBAoncallusinductionof尉，I淞e髓面蹦man啪embry08一般說(shuō)來(lái)，生長(zhǎng)素2，4．D對(duì)于針葉樹(shù)胚性愈傷組織的誘導(dǎo)是不可缺少的【l引，因此選擇適宜的2，4一D濃度非常關(guān)鍵。從表2可以看出，當(dāng)6·BA濃度為4mg時(shí)，隨著2，4一D濃度在(8—14mg·L-1)之間逐漸增加，培養(yǎng)出的愈傷組織生長(zhǎng)愈加旺盛，質(zhì)地也由稍顯疏松而變得松散。由于蓬松狀的愈傷組織已基本失去再分化的能力，所以在誘導(dǎo)濕地松胚性愈傷組織時(shí)應(yīng)將2，4．D
5、濃度控制在14mg·L。1以內(nèi)。同時(shí)從表2所反映的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，愈傷組織褐化率也隨2，4一D濃度的升高而升高。說(shuō)明要誘導(dǎo)胚性愈傷組織，需得在選定的某一范圍通過(guò)不斷調(diào)整各激素濃度之間的比例，以減少褐化的頻率。實(shí)驗(yàn)中，繼代次數(shù)越多愈傷組織的褐化率越高，最終由淡色變?yōu)楹稚?、灰色，逐漸死亡。表26．BA濃度為4m∥L時(shí)．2，4-D濃度對(duì)濕地松愈傷組織誘導(dǎo)的影響Table2111nuenceofv碰ousconcemratioIls0f2-4·DoncallIlsindl】ctionofRn吣ezZ矗”餓when6．BAconcen仃ationis4mg·L一1萬(wàn)方數(shù)據(jù)7
6、6四川林業(yè)科技28卷在2，4．D濃度為(8～14mg·L。1)范圍內(nèi)，愈傷組織褐化率由31．4％升高到45％。2．2濕地松成熟胚在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)在誘導(dǎo)愈傷組織的過(guò)程中，濕地松成熟胚的胚根、胚軸和子葉愈傷化出現(xiàn)不同步的現(xiàn)象(見(jiàn)表3)。最先形成愈傷組織的是胚根部分，其次是胚軸，最后是子葉愈傷化，且隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，各個(gè)部分形成的愈傷組織褐化的速度不一致。表3不同接種時(shí)間成熟胚在培養(yǎng)基中的變化Table3Change80fmatllreembryos0fAnw礎(chǔ)幻“甜ininductionmediuminvariousinoculadondays3討論一般地，優(yōu)
7、良胚性愈傷組織的獲得是誘導(dǎo)針葉樹(shù)體細(xì)胞胚胎形成的首要條件。以濕地松成熟胚為外植體誘導(dǎo)胚性愈傷組織過(guò)程中，出現(xiàn)了嚴(yán)重的褐化現(xiàn)象。褐化是植物組織培養(yǎng)中存在的較為普遍的一種現(xiàn)象。它與諸多因素有關(guān)，既與外植體材料的性狀有關(guān)，也與培養(yǎng)條件和培養(yǎng)方法有著密切的關(guān)系。本試驗(yàn)研究表明，濕地松成熟胚的胚根、胚軸、子葉誘導(dǎo)在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中愈傷化的速度不一致是導(dǎo)致其褐化的原因之一。胚根首先形成愈傷組織，出現(xiàn)褐化的時(shí)間較早。愈傷組織褐化所釋放的有害物質(zhì)影響其鄰近的組織，加快了整個(gè)組織的褐化速度。因此在培養(yǎng)過(guò)程中將合子胚的分成3部分培養(yǎng)，可獲得較高質(zhì)量的愈傷組織。外源生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是針
8、葉樹(shù)體細(xì)胞胚胎發(fā)生過(guò)程中
