實驗12小麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo).ppt

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1、實驗十二小麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧吓c藥品實驗方法注意事項實驗作業(yè)實驗?zāi)康恼莆諢o菌操作技術(shù)，了解組織培養(yǎng)的一般程序，將小麥成熟胚培養(yǎng)成愈傷組織。植物組織培養(yǎng)指通過無菌操作分離植物體的一部分（外植體explant），接種到培養(yǎng)基上，在人工控制的條件下（包括營養(yǎng)、激素、溫度、光照、濕度）進行培養(yǎng)，使其產(chǎn)生完整植株的過程。實驗原理植物細胞全能性：任何具有完整細胞核的植物細胞，都擁有形成一個完整植株所必須的全部遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。外植體：從植物體上分離下來的用于離體培養(yǎng)的那部

2、分材料。愈傷組織：原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團薄壁細胞，在組培中則指在離體培養(yǎng)過程中形成的具有分生能力的一團不規(guī)則薄壁細胞，多在植物體切面上產(chǎn)生。脫分化：已分化好的組織細胞在人工誘導(dǎo)條件下，恢復(fù)分生能力，回復(fù)到分生組織狀態(tài)的過程?；蛘哒f是由高度分化的植物組織或器官產(chǎn)生愈傷組織的過程。再分化：脫分化后具有分生能力的細胞再經(jīng)過與原來相同的分化過程，重新形成各類組織和器官的過程?；蛘哒f是由愈傷組織再生出小植株的過程。植物體的任何一個細胞都具有全能性。分化了的植物根、莖、葉等組織器官在一定的條件

3、下進行離體培養(yǎng)，給于一定的營養(yǎng)和激素，可以脫分化為愈傷組織。愈傷組織在不同的營養(yǎng)和激素的作用下，又可以再生出完整的小植株。植物的脫分化和再分化培養(yǎng)，證明分化了的植物細胞仍具有形成完整植株所需要的全套基因。應(yīng)用領(lǐng)域快速繁殖一株葡萄一年繁殖到3萬多株，一株蘭花一年繁殖到500萬株左右。種苗脫毒通過組織培養(yǎng)可以培育出大量的無毒種苗。已取得成功的有馬鈴薯、草莓、香蕉、葡萄等等。遠緣雜交利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種。比如遼寧果樹研究所利用這種方法獲得蘋果與梨的雜交種

4、。突變育種組織培養(yǎng)可以直接誘變和篩選出具抗病、抗鹽、高賴氨酸、高蛋白等優(yōu)良性狀的品種。中國林科院獲得了耐鹽的楊樹株系?；蚬こ袒蚬こ讨饕芯緿NA的轉(zhuǎn)導(dǎo)，而基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后必須通過組織培養(yǎng)途徑才能實現(xiàn)植株再生。生物制品如抗癌首選藥物-紫杉醇等。近年國內(nèi)在紅豆杉組織培養(yǎng)中獲得生長量很高的細胞系，每升細胞培養(yǎng)物中紫杉醇的產(chǎn)量可達0.25mg。愈傷組織利用外植體能培養(yǎng)出完整植株從高等植物的幼胚、根、莖、葉、花和果實等不同器官的組織中分離的單個細胞，經(jīng)過特殊培養(yǎng)形成愈傷組織，并可進一步誘導(dǎo)生成完整的植株。完全

5、在于高等植物細胞具有全能性蝴蝶蘭蝴蝶蘭虎頭蘭紅豆杉植物組織培養(yǎng)特點①培養(yǎng)條件可以人為控制擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災(zāi)害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長極為有利，便于穩(wěn)定地進行周年培養(yǎng)生產(chǎn)。②生長周期短，繁殖率高往往20-30d為一個周期。所以，雖然植物組織培養(yǎng)需要一定設(shè)備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級數(shù)繁殖生產(chǎn)，故總體來說成本低廉，且能及時提供規(guī)格一致的優(yōu)質(zhì)種苗或脫病毒種苗。③管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動化控制植物組織培養(yǎng)是在一定的場所和環(huán)境下，人為提供一定的溫度、光照、濕

6、度、營養(yǎng)、激素等條件，既利于高度集約化和高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動化控制生產(chǎn)。培養(yǎng)基培養(yǎng)基：是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)。沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類型的植物組織或器官，在建立一項新的培養(yǎng)系統(tǒng)時，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培養(yǎng)才有可能成功。培養(yǎng)基的種類：MS,B5,N6,White,KM-8P等。MS培養(yǎng)基的組成無機營養(yǎng)：大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg微量元素：Fe、Mn、Cu、Co、Mu、B等有機營養(yǎng)：碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖氮源：氨基酸類活性物質(zhì)：維生素、肌醇等植物激素：生長素類：2,4

7、-D、IAA、NAA、IBA等細胞分裂素類：6-BA、激動素、玉米素等其它類：赤霉素、脫落酸、乙烯支持物：瓊脂等激素配比模式生長素與細胞分裂素的比例決定著外植體的發(fā)育方向，是形成愈傷組織、長根還是長芽。大量實驗結(jié)果表明，大多數(shù)植物組織或器官的再生作用符合器官分化的植物激素控制理論，即當(dāng)生長素與細胞分裂素的比例高時，愈傷組織僅形成根；生長素與細胞分裂素的比例小時則產(chǎn)生苗；而兩種激素的比例適中時，則產(chǎn)生無結(jié)構(gòu)的愈傷組織。培養(yǎng)基母液配制為了使用方便和用量準確，常將大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物類和激素

8、類分別配制成比培養(yǎng)基濃度大若干倍的母液。當(dāng)配制培養(yǎng)基時，只需按預(yù)先計算好的量吸取母液稀釋即可。母液應(yīng)保存在冰箱中備用，保存時間不可過長，當(dāng)母液出現(xiàn)沉淀或霉菌團時，則不能使用。培養(yǎng)基的制備——母液的配制和保存(1)大量元素母液可配成濃度10倍母液。(2)微量元素母液可配成濃度100倍的母液。(3)鐵鹽母液可配成100倍的母液，(4)有機物母液可配成100倍的母液。(5)激素母液的配制每種激素必須單獨配成母液，濃度一般配成0.2mg／ml。用時根據(jù)需要取用。因為激素用量較少，一次可配成