青天葵抗甲、乙型流感病毒作用研究

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1、青天葵抗甲、乙型流感病毒作用研究【摘要】　　目的研究青天葵在體外抗甲、乙型流感病毒株作用。方法選用狗腎細胞培養(yǎng)法考察青天葵不同極性部位對甲型、乙型流感病毒的作用。結(jié)果青天葵水溶性部位對甲型流感病毒FM1有抑制作用。結(jié)論青天葵具有體外抗甲型流感病毒作用?！娟P(guān)鍵詞】青天葵甲型流感病毒乙型流感病毒抗病毒Abstract:ObjectiveAntiviralactionsofNerviliafordiiagainstinfluenzavirusinvitrowerestudied.MethodsCellculturetechnologywasusedinMDCK

2、cellstoobserveantiviralactionofabstractsofNerviliafordiiagainstinfluenzavirusAandB.ResultsWatersolublepartofNerviliafordiicaninhibittheproliferationofinfluenzavirusAinMDCKfordiiiseffectiveagainstinfluenzavirusAinvitro.Keywords:Nerviliafordii;InfluenzavirusFM1strain;Influenzavirus

3、0Bstrain;Antiviralaction青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭Nerviliafordii(Hance)Schitr.，以全草或塊莖入藥，性平，味苦、甘。有清肺止咳，健脾消積，鎮(zhèn)靜止痛，清熱解毒、散結(jié)消疬之功效，主治肺癆、咳嗽咳血、瘰疬、腫毒、跌打損傷、小兒疳積、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等［1］。目前青天葵的研究多集中在栽培、組織培養(yǎng)等方面，其藥效學方面的研究報道較少。本實驗對青天葵的抗流感病毒作用進行觀察，現(xiàn)報告如下。1材料藥物青天葵藥材購自廣東致信藥業(yè)有限公司，經(jīng)譚樹輝鑒定為蘭科植物青天葵Nerviliafordii(Hance)Schi

4、tr.。藥材用乙醇滲漉，滲漉液濃縮成濃稠浸膏，加蒸餾水轉(zhuǎn)溶，水液加石油醚萃取至石油醚層無色，石油醚層棄去。水層用氯仿萃取，至氯仿層無色，合并氯仿萃取液，濃縮得氯仿部位；水層用醋酸乙酯萃取，至醋酸乙酯層無色，合并醋酸乙酯萃取液，濃縮得醋酸乙酯部位；水層用正丁醇萃取，至正丁醇層無色，合并正丁醇萃取液，濃縮得正丁醇部位；余下的水層部位；采用水蒸汽蒸餾法提取得到揮發(fā)油部位。陽性對照藥病毒唑，批號0301006，由湖北醫(yī)藥工業(yè)研究院提供。毒種甲型流感病毒FM1株、乙型流感病毒昆40B株由中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所提供，于MDCK狗腎細胞傳代，以病變及雞紅血球

5、血凝法判斷滴度，在37℃，體積分數(shù)為5%CO2孵箱中培養(yǎng)。狗腎細胞由廣東省防疫站贈送，廣州中醫(yī)藥大學熱帶病研究所傳代保存。細胞培養(yǎng)液和維持液細胞培養(yǎng)液和維持液各為含體積分數(shù)為10%、2%的小牛血清、100kU/L青霉素、鏈霉素的DMEM。方法與結(jié)果按照《中藥新藥研制開發(fā)技術(shù)與方法》［2］上的要求進行。測定病毒的半數(shù)致細胞病變量，抗病毒試驗在96孔微量板上進行，每孔ml，細胞數(shù)為1×105個/ml，長成單層后，將青天葵提取物用維持液稀釋成4個不同濃度，棄去原培養(yǎng)液后將不同濃度樣品加入細胞孔中，每孔ml，以細胞不出現(xiàn)病變的最小稀釋度為該藥液對細胞無毒界限。同

6、時在MDCK細胞上測定攻擊病毒TCID50。實驗時設(shè)病毒對照組、正常對照組、藥物毒性組及陽性對照組。置37℃，體積分數(shù)5%CO2孵箱中培養(yǎng)。每天倒置顯微鏡下觀察病變并記錄，觀察d終止。實驗結(jié)果見表1。表1青天葵不同極性部位對甲、乙型流感病毒的抑制作用由表1可知，陽性對照藥物病毒唑亞毒性濃度100μg/ml可以抑制FM1病毒、昆40B病毒。青天葵水層部位濃度為50mg/ml時，對甲型流感病毒FM1有抑制作用，其作用強度與病毒唑相同，其他部位對甲型流感病毒均無抑制作用，青天葵5種提取部位對乙型流感病毒昆40B均無抑制作用。討論病毒是最小的生物病原體,不具有細

7、胞結(jié)構(gòu),主要由核酸核心和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成(稱為衣殼)構(gòu)成。在臨床感染疾病中,約85%是由病毒引起的。而且,很多病毒感染的致病率很高,并發(fā)癥嚴重［3］。流行性感冒簡稱流感,是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病,它具有高度的傳染性,呈周期性大流行,是危害人類健康的一種重要疾病。研究表明，在呼吸道疾病患者中，小兒的病毒檢出率為%，呼吸道合胞病毒占首位，其次是流感病毒；成人為%，流感病毒占首位，可見病毒是上呼吸道感染的主要原因之一［4］。目前國內(nèi)外用于抗甲型流感病毒的藥物有金鋼烷胺與甲基金剛烷胺、利巴韋林、病毒唑和干擾素等,但由于流感病毒血凝集素(HA)及神經(jīng)氨

8、酸酶(NA)經(jīng)常發(fā)生變異以及病毒的耐藥等問題,使流感病毒的防治問題仍很嚴峻。目前