免疫球蛋白檢測及應(yīng)用

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1、第十七章免疫球蛋白的檢測及應(yīng)用醫(yī)學(xué)檢驗系王洪興概述：人類免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）由漿細(xì)胞合成分泌的一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)。按其重鏈分為五類，IgG有四個亞型，IgA有二個亞型并有sIgA，IgM亦有二個亞型。Ig主要存在于血液中，占血漿蛋白總量的20%，也可存在于其他體液中，其含量依次為IgG、A、M、D、E。第一節(jié)IgG、IgA、IgM的測定一、單向免疫擴散法其原理是將抗血清均勻混入瓊脂，然后打孔加入待測血清（Ig），血清向四周擴散，形成可見的沉淀環(huán)，量取沉淀環(huán)直徑與標(biāo)準(zhǔn)曲線，推算出抗體含量，待測血清要做一定稀釋。該方法是經(jīng)典方法，但可能出現(xiàn)誤差。1）待

2、測血清或標(biāo)準(zhǔn)液溢出加樣孔2）固相抗體或抗原過量而使沉淀過大或過小，前者形成海德堡曲線，后者形成鉤狀效應(yīng)P543）加樣量不足或過多，或混有氣泡4）加樣孔破裂5）瓊脂板存放時間過長，水分蒸發(fā)或變形6）瓊脂半不平，厚薄不平7）打孔后挑取瓊脂將瓊脂底挑取，以致待測血清底部流溢8）擴散時置盒不水平，導(dǎo)致沉淀環(huán)不圓該方法影響因素多，實驗時間長，結(jié)果的重復(fù)性差，該技術(shù)設(shè)置了鉤狀效應(yīng)校正系統(tǒng)。第二節(jié)體液中IgG、IgA、IgM測定的臨床意義一、血清Ig定量的臨床意義1.低Ig血癥先天性低Ig血癥獲得性低Ig血癥2.高Ig血癥1）多克隆Ig增高2）單克隆Ig增高二、尿液Ig定量的臨床意義免疫循環(huán)復(fù)合

3、物沉積在腎小球基底膜并激活補體而造成腎組織損害，檢測蛋白尿，結(jié)合臨床對腎功能評價有一定的作用。尿液中檢測游離輕鏈?zhǔn)窃\斷輕鏈病的主要手段，并對多發(fā)性骨髓瘤等疾病的分型鑒定及預(yù)后判斷均有重要意義。三、腦脊液Ig定量的臨床意義中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以產(chǎn)生很強的免疫應(yīng)答，血液中的Ig可滲透至CSF，生理情況下血中通過通透性正常的血-腦屏障（bloodbrainbarrier，BBB）而進(jìn)入CSF。IgG易通過BBB，IgA略難，IgM分子大，更難通過BBB。當(dāng)腦組織或腦膜有病變時脈絡(luò)叢通透性增加，BBB發(fā)生破壞，或自身病變組織產(chǎn)生病理產(chǎn)物，進(jìn)入腦脊液，使腦脊液組織發(fā)生改變。第三節(jié)IgE和IgD的測

4、定一、IgE的測定方法1、放射免疫法：固相抗-IgE+IgE+125I標(biāo)記抗人IgE2、化學(xué)發(fā)光免疫分析法：固相抗-IgE+IgE+酶標(biāo)抗IgE+底物3、乳膠顆粒免疫濁度法4、酶免疫試驗二、IgD的測定方法（一）測定方法放射免疫測定法和乳膠顆粒免疫濁度法（二）臨床意義：IgD含量低，除SmIgD為膜表面受體外，其他生物學(xué)功能不明，在妊娠末期，大量吸煙者和IgD骨髓瘤患者血清中IgD含量升高。第四節(jié)異常免疫球蛋白的檢測一、M蛋白的檢測與鑒定M蛋白是一種異常單克隆免疫球蛋白，多見于多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤。（一）血清蛋白區(qū)帶電泳IgG型多位于α區(qū)與慢γ區(qū)IgA型多位于慢γ

5、區(qū)與β區(qū)IgM型多位于β2區(qū)或γ區(qū)IgD型多位于β區(qū)或γ區(qū)但最終鑒定需用特異性抗體，在輕鏈病時M蛋白呈淡染區(qū)帶常在β或γ區(qū)，需與尿中本周蛋白檢測或尿蛋白電泳同時觀察。（二）免疫球蛋白定量測定（三）輕鏈片段定量測定（四）免疫電泳及免疫固定電泳1.免疫電泳2.免疫固定電泳免疫固定電泳有以下特點：1.周期短2.敏感性高3.分辨清晰4.結(jié)果易于分析（五）本周蛋白的檢測即尿中游離的免疫球蛋白輕鏈，對輕鏈病作出診斷，并對多發(fā)性骨髓瘤、原發(fā)性巨球蛋白血癥、重鏈病等疾病的診斷、鑒別和預(yù)后判斷均有一定幫助。本周蛋白在pH5.0的條件下，加熱至50～60℃出現(xiàn)沉淀，繼續(xù)加熱至90℃以后又重新溶解，故稱

6、凝溶蛋白。也可用抗κ和λ型輕鏈抗血清進(jìn)行免疫電泳，為了提高檢出率，尿標(biāo)本宜先用聚乙二醇通過半透膜濃縮。二、冷球蛋白的檢測與鑒定是血液中的一種特殊蛋白質(zhì)，在4℃時不溶解并自發(fā)沉淀，30℃易于聚合，它們固定補體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，類似IC引起的疾病。冷球蛋白存在于許多疾病。冷球蛋白有兩種類型，單株型和混合型1）IgG或IgM單株型冷球蛋白2）混合型冷球蛋白。IgG、IgM、IgA多株型與IgG、IgM和補體C3混合型（一）定性分析分離血清作二支分裝，一支置4℃，一支置37℃，直立，一般于24～72小時，4℃一管可出現(xiàn)沉淀（二）定量分析將沉淀用冷pH7.0，0.05mol/L磷酸鹽緩沖液洗滌，

7、然后將沉淀再溶解于10倍體積的pH8.6的0.05mol巴比妥/巴比妥鈉緩沖液中，置37℃30min，進(jìn)行免疫電泳或免疫固定電泳進(jìn)行型別鑒定（三）注意事項1.部分單克隆冷球蛋白可在低于10℃時發(fā)生沉淀，故取標(biāo)本時要保溫2.部分冷球蛋白在冷的條件下可迅速沉淀，但有的需要數(shù)天，故此應(yīng)放置一周3.正常人血清也可含有冷球蛋白，但屬多克隆冷球蛋白的性質(zhì)，且含量低4.冷纖維蛋白原、C反應(yīng)蛋白-蛋白復(fù)合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性，實驗時應(yīng)加以區(qū)別思考題：1．IgG、IgA、