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《高效液相色譜法測定紫花高烏頭中烏頭堿的含量 》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、高效液相色譜法測定紫花高烏頭中烏頭堿的含量常福厚,韓瑞蘭,齊君,范蕾,王敏杰,尹琴【摘要】 目的測定紫花高烏頭中烏頭堿的含量，為蒙藥紫花高烏頭中烏頭堿的含量提供檢測方法，制定質(zhì)控標準。方法采用高效液相色譜法，Kromasil(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，甲醇水三乙胺（71∶29∶0.1）為流動相，流速為1.0ml/min；檢測波長235nm。結(jié)果烏頭堿濃度在29.85～149.25μg/ml范圍之間與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.9997。烏頭堿平均回收率為96.52%，RSD=1.19%。結(jié)論采用
2、高效液相色譜法測定紫花高烏頭中烏頭堿的含量，具有分離效果好、簡便、結(jié)果準確等優(yōu)點?！娟P(guān)鍵詞】紫花高烏頭烏頭堿高效液相色譜法 紫花高烏頭為毛茛科植物紫花高烏頭AconitumexcelsumRrichb.的全草，蒙藥名為寶日-泵嘎,收載于《中華醫(yī)學百科全書》（蒙醫(yī)分卷）《認藥白晶鑒》《無誤蒙藥鑒》中，具有止咳、清肺之功效,主治流感、肺感、肺熱、瘟疫等作用〔1〕，其中烏頭堿既是其有效成分,也是其毒性成分。《中國藥典》〔2〕采用比色法檢查烏頭堿的含量,而本研究建立了以高效液相色譜測定紫花高烏頭中烏頭堿含量的方法，以控制
3、蒙藥材紫花高烏頭的質(zhì)量。 1器材 1.1儀器依利特UV-230+高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司):UV-230+紫外-可見檢測器、P230/P230p高壓恒流泵、EC2000色譜工作站?！ ?.2材料紫花高烏頭采自內(nèi)蒙古赤峰市克什克騰旗大局子林場、赤峰市克什克騰旗紅山子鄉(xiāng)、赤峰市寧城縣，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)學院藥學院生藥學教研室龐秀生教授鑒定為毛茛科植物紫花高烏頭AconitumexcelsumRrichb.的全草。方法學考察中均采用赤峰市克什克騰旗大局子林場所采集到的樣品。烏頭堿對照品（中國藥品生物制品檢定
4、所提供，批號110720-200308）；甲醇為色譜純，磷酸、鹽酸等試劑均為分析純，水為雙蒸水?！ ?方法與結(jié)果 2.1色譜條件色譜柱為Kromasil(250mm×4.6mm，5μm),流動相為甲醇水三乙胺（71∶29∶0.1）；流速為1.0ml/min；檢測波長235nm；進樣量20μl。以此條件，烏頭堿能與其它成分達到較好分離效果。結(jié)果見圖1～2。 2.2對照品溶液的配制取烏頭堿對照品5.9mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，然后加甲醇至刻度，搖勻，即得（每毫升中含烏頭堿0.597mg）?！ ?.3供
5、試品溶液的制備取本品10g，過60目篩，精密稱定，加氨試液4ml，苯50ml，超聲30min，用酸水（2%鹽酸）萃取兩次，20ml/次，酸水調(diào)pH值為9，用氯仿萃取2次，20ml/次，合并氯仿液，低溫減壓揮干，殘渣用甲醇溶解，定容至10ml容量瓶中，搖勻，即得。 2.4標準曲線的制備精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml對照品溶液分別置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。分別吸取20μl注入高效液相色譜儀,記錄峰面積。以對照品溶液濃度為橫坐標,對照品峰面積為縱坐標,進行線性回歸,標準線性回歸方程為
6、Y=18.269X-25.583，r=0.9997。實驗表明，烏頭堿濃度在29.85～149.25μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?！ ?.5精密度實驗取供試品溶液，重復進樣5次，記錄峰面積并計算，結(jié)果烏頭堿的平均含量為0.0695mg/g，RSD為0.86%?！ D1烏頭堿對照品HPLC圖譜（略） 圖2紫花高烏頭HPLC圖譜（略） 2.6穩(wěn)定性實驗取紫花高烏頭供試品溶液在0，1，2，3，4，5，6，9h分別進樣20μl，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.43%，表明烏頭堿在9h內(nèi)保持穩(wěn)定?！ ?.7重復性實驗取
7、赤峰市克什克騰旗大局子林場供試品5份，各約1g,精密稱定，分別按樣品提取方法提取、測定，結(jié)果烏頭堿品均含量為0.0671mg/g，RSD為1.78%?！ ?.8加樣回收率實驗取赤峰市克什克騰旗大局子林場供試品5份，各約5g,精密稱定，分別加入烏頭堿標準品溶液（0.351mg/ml）1ml，按供試品溶液的方法處理并測定含量，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。烏頭堿平均回收率為96.52%，RSD為1.19%。結(jié)果表明本方法準確可靠?！ ”?樣品中烏頭堿含量加樣回收實驗結(jié)果（略） 2.9樣品含量測定取3個批次的樣品各兩份，
8、每份約10g,精密稱定，按“2.3”項下操作，取20μl注入高效色譜儀，以色譜條件測定，計算烏頭堿的含量。結(jié)果見表2?！ ”?樣品含量測定結(jié)果（略） 3討論 中藥成分的提取多采用冷浸滲流法、煎煮法、有機溶劑加熱回流提取法，但提取的效果不盡相同。曾采用苯加氨試液浸泡，放置過夜的方法，對紫花高烏頭進行提取，但效果不甚理想。本實驗采用在堿性條件下用苯超聲提取，
