人腺樣囊性癌多藥耐藥細胞系的建立

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1、人腺樣囊性癌多藥耐藥細胞系的建立：周曉冬　宋國祥　隋志方　暢繼武【摘要】　　目的：建立人腺樣囊性癌耐藥細胞系，為闡明腺樣囊性癌的多藥耐藥機制及逆轉(zhuǎn)耐藥提供模型及研究依據(jù)。方法：以長春新堿（VCR）為誘導劑，通過濃度遞增間斷刺激法對人腺樣囊性癌細胞系（ACC）進行體外誘導耐藥，建立耐VCR的腺樣囊性癌細胞系A(chǔ)CC/VCR。細胞計數(shù)法繪制細胞生長曲線，噻唑藍（MTT）比色法檢測細胞對化療藥物敏感性。結(jié)果：ACC經(jīng)體外誘導后，ACC/VCR細胞對長春新堿（VCR）、阿霉素（ADM）和平陽霉素（PYM）的耐藥性明顯

2、增強，具有交叉耐藥，對環(huán)磷酰胺（CTX）、氟尿嘧啶（5-FU）和順鉑（DDP）耐藥性無明顯變化。耐藥前后ACC細胞的生長曲線、群體倍增時間和光鏡下的形態(tài)無明顯改變。結(jié)論：VCR可誘導腺樣囊性癌細胞產(chǎn)生多藥耐藥?！娟P(guān)鍵詞】腺樣囊性癌　多藥耐藥　長春新堿　　EstablishmentofmultidrugcelllineofhumanadenoidcysticcarcinomaAbstractAIM:Toestablishaninvitroresistancemodelofadenoidcysticcarcin

3、omaationforelucidatingthemechanismsofmultidrugresistance(MDR),improvingthechemotherapyscheme,evaluatingtheprognosisandreservingtheMDRinadenoidcysticcarcinoma.METHODS:Theresistancecellline,ACC/VCR,entofadenoidcysticcarcinoma.Thegroycine(ADM)andpingyangmycin

4、(PYM),butnotresistanttoCyclophosphamide(CTX),fluorouracil(5-FU)andcisplatin(DDP).Thereeandmorphologicalchangesbeta.·KEYDR)[3]。多藥耐藥的產(chǎn)生是導致腫瘤產(chǎn)生耐藥和化療失敗的重要原因之一。我們通過長春新堿誘導建立腺樣囊性癌耐藥細胞系，旨在為闡明腺樣囊性癌的多藥耐藥機制，指導多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的研究提供模型和研究依據(jù)。1材料和方法1.1材料人腺樣囊性癌(ACC)細胞系購自上海申能博彩公司。RP

5、MI1640干粉培養(yǎng)基(Gibco公司),胎牛血清(天津灝陽生物有限公司，56℃40min滅活補體),青、鏈霉素(石家莊制藥廠),谷氨酰胺（L-glutamina）(Gibco公司)，胰蛋白酶(Sigma公司),依地酸二鈉（EDTA）(廣州化學試劑廠),二甲基亞砜（DMSO）(北京鼎國生物有限公司),噻唑藍（MTT）(北京鼎國生物有限公司),長春新堿（vincristine,VCR）(上海華聯(lián)制藥有限公司),環(huán)磷酰胺(CTX)(上海華聯(lián)制藥有限公司),阿霉素(adriamycin,ADM)(深圳萬樂藥業(yè)有限

6、公司),氟尿嘧啶(5-FU)(天津市氨基酸公司人民制藥廠),平陽霉素(PYM)(天津太河制藥有限公司)，順鉑(DDP)(山東齊魯制藥廠)。CO2培養(yǎng)箱（Heraeus，德國），倒置顯微鏡（Olympus-1M，日本），生物顯微鏡（OlympusBH-2，日本），紫外分光光度計（UV754，上海分析儀器廠），臺式高速離心機（Allegra64R，美國Beckman），磁力攪拌器（江蘇省金壇市通濟儀器廠），酶聯(lián)儀（DG-3022A，南京電子管廠）。1.2方法ACC細胞系培養(yǎng)在含100ml/L滅活胎牛血清、100

7、kU/L青、鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中。培養(yǎng)條件：37℃，50ml/LCO2，每3d換液1次，2.5g/L胰酶、0.2g/LEDTA消化傳代，約5d傳代1次。采用VCR濃度遞增間斷刺激法選擇耐藥細胞，具體步驟如下：VCR15μg/L×7d，去藥7d，VCR30μg/L×7d，去藥7d，VCR60μg/L×7d，去藥7d，VCR60μg/L×7d，去藥7d，VCR120μg/L×7d，去藥7d，VCR120μg/L×7d，去藥7d，VCR250μg/L×7d，去藥7d，VCR250μg/L×7d，去藥7

8、d，無藥培養(yǎng)7d后進行實驗。取生長狀態(tài)良好的細胞，2.5g/L胰酶、0.2g/LEDTA消化制成細胞懸液，計數(shù)，將細胞懸液接種于24孔板，每孔1mL，接種濃度1×107/L，37℃，50ml/LCO2培養(yǎng)。每日取3孔板細胞進行計數(shù)，計算均值。連續(xù)觀察7d，其間培養(yǎng)3d后給未計數(shù)的細胞換液。以培養(yǎng)時間為橫軸，細胞數(shù)為縱軸（對數(shù)），在半對數(shù)坐標紙上繪制生長曲線，根據(jù)公式計算細胞在對數(shù)生長期的倍增時間。TD(倍增時間)