人腺樣囊性癌多藥耐藥細(xì)胞系的建立論文

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1、人腺樣囊性癌多藥耐藥細(xì)胞系的建立論文周曉冬宋國(guó)祥隋志方暢繼武【摘要】目的：建立人腺樣囊性癌耐藥細(xì)胞系，為闡明腺樣囊性癌的多藥耐藥機(jī)制及逆轉(zhuǎn)耐藥提供模型及研究依據(jù)。方法：以長(zhǎng)春新堿（VCR）為誘導(dǎo)劑，通過濃度遞增間斷刺激法對(duì)人腺樣囊性癌細(xì)胞系（ACC）進(jìn)行體外誘導(dǎo)耐藥，建立耐VCR的腺樣囊性癌細(xì)胞系A(chǔ)CC/VCR。細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性。結(jié)果：ACC經(jīng)體外誘導(dǎo)后，ACC/VCR細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿（VCR）、阿霉素（ADM）和平陽(yáng)霉素（PYM）的耐藥性明顯增強(qiáng)，具有交叉耐藥，對(duì)環(huán)磷酰胺（CTX）、氟尿嘧啶（5-FU）和順鉑（

2、DDP）耐藥性無明顯變化。耐藥前后ACC細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線、群體倍增時(shí)間和光鏡下的形態(tài)無明顯改變。結(jié)論：VCR可誘導(dǎo)腺樣囊性癌細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥?！娟P(guān)鍵詞】腺樣囊性癌多藥耐藥長(zhǎng)春新堿EstablishmentofmultidrugcelllineofhumanadenoidcysticcarcinomaAbstractAIM:Toestablishaninvitroresistancemodelofadenoidcysticcarcinomaationforelucidatingthemechanismsofmultidrugresistance(MDR),improvin

3、gthechemotherapyscheme,evaluatingtheprognosisandreservingtheMDRinadenoidcysticcarcinoma.METHODS:Theresistancecellline,ACC/VCR,entofadenoidcysticcarcinoma.Thegroycine(ADM)andpingyangmycin(PYM),butnotresistanttoCyclophosphamide(CTX),fluorouracil(5-FU)andcisplatin(DDP).Thereeandmorphologic

4、alchangesbeta.·KEYDR)3。多藥耐藥的產(chǎn)生是導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生耐藥和化療失敗的重要原因之一。我們通過長(zhǎng)春新堿誘導(dǎo)建立腺樣囊性癌耐藥細(xì)胞系，旨在為闡明腺樣囊性癌的多藥耐藥機(jī)制，指導(dǎo)多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑的研究提供模型和研究依據(jù)。1材料和方法1.1材料人腺樣囊性癌(ACC)細(xì)胞系購(gòu)自上海申能博彩公司。RPMI1640干粉培養(yǎng)基(Gibco公司),胎牛血清(天津?yàn)?yáng)生物有限公司，56℃40min滅活補(bǔ)體),青、鏈霉素(石家莊制藥廠),谷氨酰胺（L-glutamina）(Gibco公司)，胰蛋白酶(Sigma公司),依地酸二鈉（EDTA）(廣州化學(xué)試劑廠),二甲基亞砜（D

5、MSO）(北京鼎國(guó)生物有限公司),噻唑藍(lán)（MTT）(北京鼎國(guó)生物有限公司),長(zhǎng)春新堿（vincristine,VCR）(上海華聯(lián)制藥有限公司),環(huán)磷酰胺(CTX)(上海華聯(lián)制藥有限公司),阿霉素(adriamycin,ADM)(深圳萬樂藥業(yè)有限公司),氟尿嘧啶(5-FU)(天津市氨基酸公司人民制藥廠),平陽(yáng)霉素(PYM)(天津太河制藥有限公司)，順鉑(DDP)(山東齊魯制藥廠)。CO2培養(yǎng)箱（Heraeus，德國(guó)），倒置顯微鏡（Olympus-1M，日本），生物顯微鏡（OlympusBH-2，日本），紫外分光光度計(jì)（UV754，上海分析儀器廠），臺(tái)式高速離心機(jī)（All

6、egra64R，美國(guó)Beckman），磁力攪拌器（江蘇省金壇市通濟(jì)儀器廠），酶聯(lián)儀（DG-3022A，南京電子管廠）。1.2方法ACC細(xì)胞系培養(yǎng)在含100ml/L滅活胎牛血清、100kU/L青、鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中。培養(yǎng)條件：37℃，50ml/LCO2，每3d換液1次，2.5g/L胰酶、0.2g/LEDTA消化傳代，約5d傳代1次。采用VCR濃度遞增間斷刺激法選擇耐藥細(xì)胞，具體步驟如下：VCR15μg/L×7d，去藥7d，VCR30μg/L×7d，去藥7d，VCR60μg/L×7d，去藥7d，VCR60μg/L×7d，去藥7d，VCR120μg/L×7d，

7、去藥7d，VCR120μg/L×7d，去藥7d，VCR250μg/L×7d，去藥7d，VCR250μg/L×7d，去藥7d，無藥培養(yǎng)7d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，2.5g/L胰酶、0.2g/LEDTA消化制成細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液接種于24孔板，每孔1mL，接種濃度1×107/L，37℃，50ml/LCO2培養(yǎng)。每日取3孔板細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算均值。連續(xù)觀察7d，其間培養(yǎng)3d后給未計(jì)數(shù)的細(xì)胞換液。以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，細(xì)胞數(shù)為縱軸（對(duì)數(shù)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制生長(zhǎng)曲線，根據(jù)公式計(jì)算細(xì)胞在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的倍增時(shí)間。TD(倍增時(shí)間)=t（培養(yǎng)時(shí)間h）×