酸性染料比色法測定苦參藥材中總生物堿的含量

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1、酸性染料比色法測定苦參藥材中總生物堿的含量【關(guān)鍵詞】酸性染料比色法　苦參堿　含量測定AbstractObjective：ToestablishamethodtodeterminetotalalkaloidsinradixSophoralavescensbyaciddyecolorimetry．Methods：totalalkaloidsofradixSophoralavescenshydroxidesolution,dissolvedixedothymolsolutionandchloroform，andthenthemixtureixed

2、，theabsorbabilityofchloroformlayer．Results：Thedetectionconcentrationofmatrineshog/mL～0.20mg／mL(r=0.9992)，theaveragerecoverydifferentsourceinedethod.Conlusion：Theestablishedmethodissimpleandaccurate，etry；Matrine；Contentdetermination中藥苦參是豆科植物苦參SophoraflavescensAit.的干燥根，所含有的生

3、物堿是苦參藥理作用的主要有效成分，具有抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗心律失常、平喘、鎮(zhèn)咳、殺菌等作用［１，２］。生物堿含量的多少是評價苦參藥材質(zhì)量好壞的重要指標之一。酸性染料比色法常用于制劑中生物堿的含量測定［３～5］，采用酸性染料比色法，以苦參堿為對照品，對不同產(chǎn)地的苦參中的總生物堿成分，進行了含量測定，建立了苦參藥材中總生物堿含量的測定方法，為苦參藥材的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。1儀器與試藥756PL（IV）紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；PHS-4CT型數(shù)字酸度計（上?？祪x儀器有限公司）?？鄥A標準品（中國藥品生物制品檢定所），溴代

4、麝香草酚藍和其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1對照品溶液的制備準確稱取苦參堿標準品適量，加50%乙醇制備成濃度為1mg/mL的對照品溶液，備用。2.2標準曲線的繪制及測定方法將“2.1”項下苦參堿對照品溶液稀釋至20μg/mL，各準確量取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，置于干燥的具塞三角瓶中，各加水至5mL，分別加入pH=7.6緩沖液5mL,再依次精密加入0.025%溴麝香草酚藍標準液1.0mL，氯仿10.0mL，振搖1min，倒入50mL分液漏斗放置分層，靜置1h，分取氯仿層。用分光光度計掃描、測定，結(jié)果顯示，苦參堿與溴代麝香

5、草酚藍形成的復(fù)合物在413nm波長處有最大吸收峰，故選擇413nm為測定波長。另以同法操作(不加苦參堿對照品溶液)的氯仿為空白在413nm波長處測定吸收度。以濃度(C)為橫坐標，吸收度(A)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程C=5.362X-0.012(γ=0.9992)，結(jié)果表明，苦參堿檢測濃度在0.004mg/mL～0.02mg／mL范圍與吸收度線性關(guān)系良好。2.3穩(wěn)定性實驗取20.0μg/mL對照品溶液3.0mL按2.2方法制備標準品供試液和空白對照液，在波長413nm處進行測定。并在室溫下每隔1h測定1次含量，連續(xù)測定8次，結(jié)果表明

6、，待測液在8h內(nèi)穩(wěn)定，其RSD=0.47%(n=8)。2.4精密度實驗取20.0μg/mL標準對照液3.0mL，按2.2下方法制備標準品供試液和空白對照液，在413nm波長處測定，重復(fù)測定5次。結(jié)果RSD=0.23%。表1中藥材苦參含量測定結(jié)果批次產(chǎn)地總生物堿含量(mg/g)1河北安國1.032安徽亳州2.263山西長治1.892.6苦參總生物堿的含量測定　將三種不同產(chǎn)地的苦參藥材粉碎后，分別精密稱取干燥至恒重的通過60目篩的生藥粉0.1550g,加0.1%鹽酸10mL,冷浸4h后，超聲提取1h，濾過，濾液用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至中

7、性，取調(diào)節(jié)至中性的濾液5.0mL置分液漏斗中，依次精密加入pH=7.6緩沖溶液5mL、0.025%溴麝香草酚藍標準液1.0mL，氯仿10.0mL，振搖1min，放置分層，靜置1h，分取氯仿層。在413nm波長處，以不加藥材，同法操作的氯仿為空白，測定吸光度。將測得的吸光度值代入標準曲線可以計算求得苦參藥材中生物堿的含量。3討論3.1由于苦參藥材含有的生物堿成分都易溶于酸水溶液，因此在藥材含量測定中采用0.1%鹽酸作為提取液，冷浸結(jié)合超聲提取的方法，可以保證生物堿成分的提取完全。3.2本實驗采用酸性染料比色法，是根據(jù)在一定pH介質(zhì)中，生物堿類

8、與氫離子生成陽離子，一些酸性染料在此條件下可解離成陰離子而與上述陽離子定量結(jié)合成有色絡(luò)合物，可被有機溶劑定量提取的原理，用苦參堿作為標準物質(zhì)在pH=7.60的條件下與溴麝香草酚藍