【醫(yī)學ppt課件】離體蛙心灌流

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1、實驗內(nèi)容離體蛙心灌流實驗目的學習離體蛙心灌流的方法觀察Na+、K+、Ca2+以及腎上腺素、心得安等對離體心臟活動的影響實驗原理心臟的活動具有自動節(jié)律性。動物的心臟離體后，用理化特性類似于其血漿的替代液（任氏液）灌流后，在一定的時間內(nèi)，仍能有節(jié)律的收縮和舒張，改變灌流液的成分，則可引起心臟活動的改變。實驗原理心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的支配。交感神經(jīng)興奮時，其末梢釋放遞質(zhì)---去甲腎上腺素（NA），作用于心肌細胞上的β受體，使心肌收縮力增強；迷走神經(jīng)興奮時，其末梢釋放遞質(zhì)—乙酰膽堿（Ach），作用于心肌細胞膜上的M受體，對心肌細胞起抑制作用，使心肌的自律性降低

2、。用受體阻斷劑（心得安）阻斷受體，則相應(yīng)的遞質(zhì)不能發(fā)揮作用。實驗用品蛙心套管、常用手術(shù)器械、蛙心夾、蛙板、棉線、毀髓針、任氏液、滴管、燒杯、5%NaCl、2%CaC12、1%KCl、0.01%心得安、0.01%腎上腺素、計算機和機械-電換能器、鐵支架、雙凹夾。蟾蜍或蛙,實驗動物方法與步驟一.離體蛙心的制備（斯氏蛙心插管法）取一只個體較大的蟾蜍，用毀髓針雙毀脊髓和腦，仰臥固定于蛙板上；暴露心臟：左手持鑷提起胸骨后端的皮膚，右手持剪將皮膚剪一小口，然后將剪刀由開口處伸入皮下，朝向兩側(cè)下頜角方向剪開皮膚，并將皮膚掀向頭端。用鑷子提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一小

3、口,將粗剪刀緊貼胸壁伸入胸腔(避免損傷下面的心臟和血管)，沿皮膚切口方向剪開肌肉，剪斷左右烏喙骨和鎖骨，使創(chuàng)口成一個倒三角形。左手持眼科鑷，小心提起心包膜，右手用眼科剪剪開心包膜,將心包膜剝離,使心臟完全暴露。用眼科剪小心剪去左右主動脈干周圍的心包膜和系膜。在左主動脈下穿一線,距動脈圓錐5mm處結(jié)扎。再在左、右兩主動脈干下穿一線，打一活節(jié)備用。左手提起左動脈干上的結(jié)扎線，右手用眼科剪在動脈圓錐前端沿向心方向剪一斜口，將少量任氏液加入斯氏蛙心套管中，立即用右手食指堵塞住套管上口，然后將套管尖端由左主動脈上的剪口插入動脈圓錐。當套管尖端到達動脈圓錐基部時，應(yīng)將

4、套管稍稍后退，使尖端向動脈圓錐部后方及心尖方向推進，經(jīng)主動脈瓣插入心室腔內(nèi)，不可插入太深,以免插破心室壁或心室堵住套管下口。此時可見套管中液面隨心臟搏動而上下移動。用滴管吸去套管中的血液，補充新鮮的任氏液，如此反復幾次，使任氏液完全替代血液,若套管插入心室未見液面上下移動,則可能是凝血小塊堵塞了套管下口。提起備用線,將左主動脈連同插入的套管扎緊,再將結(jié)扎線固定在套管的小鉤上。剪斷結(jié)扎線上方的血管,輕輕提起套管和心臟,在心臟的下方繞一線，將左右肺靜脈及前后腔靜脈一起結(jié)扎(注意切勿損壞靜脈竇),于結(jié)扎線下方剪去所有牽連的組織,將心臟摘出。保持套管內(nèi)液面恒定高度

5、,即灌流液充滿套管三分之一，即可進行實驗。二.連接實驗裝置：離體蛙心制備好后，將套管固定在鐵支架上，用帶線蛙心夾夾住少許心尖肌肉，蛙心夾上的系線連至張力換能器的著力點上，注意不要過度牽拉心臟。然后將張力換能器連在計算機上。三.開機實驗系統(tǒng)實驗項目循環(huán)實驗蛙心灌流觀察項目向套管內(nèi)加入任氏液，作好正常標記，觀察正常的心搏曲線。向套管內(nèi)加入2—4滴5%的NaCL溶液，立即用專門滴管輕輕混勻，同時作好加藥標記，觀察心搏曲線的頻率振幅變化。向套管內(nèi)加入1—2滴2%的CaC12溶液，立即用專門滴管輕輕混勻，同時作好加藥標記，觀察心搏曲線的頻率振幅變化。觀察項目向套管內(nèi)

6、加入1—2滴1%KCL溶液，同上所述，混勻、標記、描記并觀察心搏曲線。向套管內(nèi)加入1—2滴0.01%腎上腺素溶液，同上所述，混勻、標記、描記并觀察心搏曲線。向套管內(nèi)加入1—2滴0.01%心得安溶液，描記并觀察心搏曲線變化。然后加入與前一步等量的腎上腺素溶液，描記并觀察心搏曲線變化。以上每步當曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即吸去套管內(nèi)的灌流液，用新鮮的任氏液換洗幾次，同時作好換洗記號。使灌洗液面保持原高度。等待心搏恢復正常。然后做下一觀察項目。注意事項分離血管時，應(yīng)盡量去凈心包膜。每次換液時，液面均應(yīng)保持恒定的高度，即灌流液充滿套管三分之一。每次加藥應(yīng)用專門的滴管，

7、并逐滴加入，用滴管輕輕混勻，使之迅速發(fā)揮作用，若作用不明顯再逐滴補加。隨時滴加任氏液于心臟表面使之保持濕潤狀態(tài)。每次加藥出現(xiàn)明顯效應(yīng)后，應(yīng)立即換洗灌流液數(shù)次，待心跳恢復正常后，再進行下一步驟。實驗順序可以根據(jù)心搏情況臨時改變，如心搏變慢變?nèi)鯐r，可先加入腎上腺素或Ca2+。離體蛙心灌流實驗裝置蛙心套管支架換能器蛙心計算機