離體蛙心灌流.ppt

《離體蛙心灌流.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在應用文檔-天天文庫。

1、離體蛙心灌流【目的要求】1、學習斯氏離體蛙心灌流法。2、觀察離子及藥物等對離體心臟活動的影響?！净驹怼啃呐K的正常節(jié)律性活動需要一個適宜的內(nèi)環(huán)境（如Na＋，K＋，Ca2＋等的濃度及比例、pH值和溫度），內(nèi)環(huán)境的變化直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動。將失去神經(jīng)支配的離體心臟保持于適宜的理化環(huán)境中（任氏液Ringersolution），在一定時間內(nèi)仍能產(chǎn)生自動節(jié)律性興奮和收縮。離子對心臟活動的影響改變?nèi)问弦旱慕M成成分，離體心臟的活動就會受到影響。K+參與心肌細胞的復極化和自律細胞的4期自動去極化過程，其改變不僅取決于細胞內(nèi)外K+濃度梯度，還與細胞膜對K+通透性有關，因此

2、其影響是多方面的。Ca2+對Na+內(nèi)流存在競爭抑制作用，稱膜屏障作用，對靜息電位無影響。[Ca2+]o↑，可使心肌細胞的興奮性降低，傳導減慢，收縮力增強。在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素，與心肌細胞β受體結合，使心肌收縮力加強，傳導速度加快，心率加快；阻斷劑心得安迷走神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，與心肌細胞M受體結合，使心肌收縮力減弱，心肌傳導速度減慢，心率減慢；阻斷劑阿托品【動物、器材與試劑】蟾蜍或蛙、紗布、毀髓針、眼科鑷、手術剪、眼科剪、蛙板、蛙釘、玻璃分針、滴管、細棉線、蛙心夾、鐵支架、萬能滑輪、小燒杯、斯氏蛙心套管、雙凹夾、套管夾、

3、張力換能器、生物信號計算機采集系統(tǒng)任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1/10000腎上腺素、1/10000乙酰膽堿、阿托品、300U/ml肝素?！痉椒ㄅc步驟】1、儀器準備2、離體蛙心的制備3、連接實驗裝置4、實驗觀察1、儀器準備打開計算機生物信號采集系統(tǒng)，選擇實驗項目-循環(huán)實驗-離體蛙心灌流。熟悉實驗標記的使用。參考：生理模擬實驗軟件-離子和藥物對離體蛙心的影響2、離體蛙心的制備（斯氏蛙心插管法）在左主動脈下方穿線，靠上端結扎，作插管時牽引用在主動脈干下方穿線，在動脈圓錐上方打一活結備用（用以結扎和固定插管）。取蛙或蟾蜍，雙毀髓后背位置于蛙板上

4、，暴露心臟。仔細識別心臟周圍的大血管。左手提起左主動脈上方的結扎線，右手用眼科剪在結扎線下方、沿向心方向將動脈管壁剪一斜口（注意要剪破血管內(nèi)膜，每次心縮時有血自切口涌出，但不要把血管剪斷，剪口位置視套管尖端長度與心臟大小而定）。選擇大小適宜的斯氏蛙心套管，盛入少量任氏液（內(nèi)加一滴肝素溶液，套管內(nèi)2－3cm高度）。左手用眼科鑷提起切口緣，右手將注有任氏液的斯氏套管插入動脈干內(nèi)，然后左手持左側血管分支上的結扎線向外拉，右手將蛙心套管送入動脈圓錐。當套管尖端到達動脈圓錐基部時，應將套管稍向后退（因主動脈內(nèi)有螺旋瓣會阻礙插管前進），并將套管尾端稍向右主動脈方向及腹側面傾斜，

5、使插管尖端向動脈圓錐的背部后下方及心尖方向推進，在心室收縮時經(jīng)主動脈瓣進入心室。注意插管不可插得過深，插管的斜面應朝向心室腔，以免插管下口被心室壁堵住。此時可見血液沖入套管，并使液面隨心臟搏動而上下移動，表明操作成功（否則需退回并重新插入）用滴管吸去套管中的血液，換新鮮任氏液。穩(wěn)定住套管后，輕輕提起備用線，將左、右主動脈連同插入的套管用雙結扎緊（不得翻液），再將結線固定在套管的小玻璃鉤上，然后剪斷結扎線上方的血管?？辞屐o脈竇的位置，在心臟的下方繞一線，將左右肺靜脈及前后腔靜脈一起結扎（注意切勿損壞靜脈竇）。輕輕提起套管和心臟，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，僅保留靜脈

6、竇與心臟的聯(lián)系，使心臟離體。用任氏液反復沖洗心室內(nèi)余血，使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致（1.5－2cm，或在套管的下1/3處結一線作為標志，每次換任氏液時使液面與此線相平），即可進行實驗。其他方法技巧用蛙心夾提起心尖，使心室與動脈圓錐約呈100°-200°的鈍角，然后當心室縮緊時把套管平直往心室方向推進。當感覺套管進入心室后再把心尖放平，隨即將套管稍向心室推進，調(diào)整合適位置，可見套管內(nèi)液面隨心跳而升降。3、連接實驗裝置將套管固定在支架上，用蛙心夾在心舒期夾住少許心尖部肌肉（不要夾多，以免夾破心室而漏液）。將蛙心夾上的系線繞過一個滑輪與張力傳感器

7、相連。勿使灌流液滴到傳感器上。調(diào)節(jié)記錄儀器上的收縮曲線的幅度適中。4、實驗觀察1)記錄正常心搏曲線。2)改用0.65%NaCl溶液灌流，并作好加藥標記，觀察心搏變化。待曲線出現(xiàn)明顯變化時，立即吸去套管中的灌流液，同時做好沖洗標記，并用新鮮任氏液清洗2－3次，待心搏恢復正常。注意：換液時切勿碰套管，以免影響描記曲線的基線，同時保持灌流液面一致（下同）。3)向套管內(nèi)加2－6滴5%NaCl溶液，作好加藥標記，觀察心搏曲線的頻率及振幅變化。當曲線出現(xiàn)明顯變化時，應立即吸去套管中的灌流液，并做好沖洗標記，迅速用新鮮任氏液清洗2－3次，待心搏恢復正常。4)向套管內(nèi)加1－2滴