菠菜中草酸測定

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1、菠菜中草酸的提取及含量測定一、實驗?zāi)康?.學(xué)會沉淀法提取操作，進(jìn)一步熟悉過濾，離心，提取等操作，掌握均勻沉淀法的原理。2.學(xué)習(xí)文獻(xiàn)資料的查詢方法，學(xué)會制作實驗方案，綜合運用各種分析方法解決實際問題。3.學(xué)習(xí)食品采樣方法，綜合分析菠菜中草酸的含量分布情況。二、實驗原理草酸是一種二元羧酸，是植物體內(nèi)普遍存在的一種組分，在菠菜、莧菜、生菜等許多蔬菜作物體內(nèi)都有較高的含量。從環(huán)境毒理學(xué)和食品營養(yǎng)學(xué)角度看，草酸在蔬菜作物可食部位的大量累積會影響到人類的身體健康。本實驗采取靈敏度較高的比色法測菠菜中草酸含量。采用722型分光光度計測定，F(xiàn)e在pH值1.8~2.5的KCL-HCL緩沖液中與

2、磺基水楊酸（SSAL）和草酸均生成絡(luò)合物，F(xiàn)e3+和草酸的絡(luò)合物能使與Fe3+磺基水楊酸的紫色絡(luò)合物顏色變淺，測定Fe3+的磺基水楊酸絡(luò)合物的吸光度，隨著草酸量的增加而降低，據(jù)此可計出樣品中草酸根的含量。三、儀器和試劑儀器部分：榨汁機(jī)，722型分光光度計，水浴鍋，電子天平，臺秤，100mL容量瓶3個，250mL容量瓶4個，200mL燒杯2個，500mL燒杯2個，離心機(jī)及離心管，長頸漏斗，鐵架臺，濾紙。試劑部分：新鮮菠菜，磺基水楊酸（分析純）（s），F(xiàn)eCL(s)，草酸鈉（s），KCL（s），12mol/L濃鹽酸，0.5mol/L稀鹽酸，去離子水，pH試紙。四、實驗步驟1.鐵標(biāo)

3、準(zhǔn)液的制備（0.5mg/mL）：稱取0.4gFeCl3于500mL燒杯中，加入250mL去離子水溶解。2.磺基水楊酸（SSAL）的配制（0.5%）：稱取0.5g磺基水楊酸（分析純）于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。3.草酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液的配制（2mg/mL）：稱取0.2000g草酸鈉于200mL燒杯中，加入去離子水，稍加熱，使其溶解，移入100mL容量中，用去離子水定容。4.緩沖液的配制（pH值2）：稱取3.7g左右KCL于500mL燒杯中，加入去離子水少量，在水浴鍋上微熱溶解，加12mol/L濃鹽酸用pH試紙使pH值為2，移入250mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度。5.草酸

4、的待測液制備：將菠菜在去離子水中洗滌2次，晾干。稱取菠菜可食部位100g，加入100ml水，壓榨2—3min，每2g勻漿折算為1g試樣，稱取1份勻漿50g，用100mL水洗入250mL容量瓶，加入0.5mL濃度為0.5mol/L的HCL溶液，澄清，置于70~80度水浴上加熱30min，其間搖動數(shù)次，取出冷卻，加水至刻度，搖勻過濾，將濾液經(jīng)10000r/min離心10min，得到的即是草酸待測液。6.比色法測定菠菜中草酸含量的條件研究該最大吸收波長即為測定時所要選擇的最佳波長508nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按照以上確定的條件，按下列順序：加液：2mLFe3+，20mL緩沖液，1.2m

5、L磺基水楊酸，從容量瓶中依次取出已經(jīng)配制的草酸鈉溶液體積為：0、0.1、0.2、0.4、0.8mL，再用蒸餾水定容至100mL容量瓶中，顯色30min后，以蒸餾水為參比液，在508nm波長處進(jìn)行比色測定。根據(jù)測定結(jié)果，繪制草酸含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過計算機(jī)擬合，獲得該標(biāo)準(zhǔn)曲線A關(guān)于x的方程。其中式中，x為顯色體系的草酸的質(zhì)量濃度（mg/mL），A為吸光度。7.菠菜中的待測液中草酸含量的測定：用菠菜待測液替代草酸根溶液，依次取0，0.2,0.4,0.6mL用蒸餾水定容至100mL容量瓶中。顯色30min后，以蒸餾水為參比液，在510nm波長處進(jìn)行比色測定，其余按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的

6、方法，進(jìn)行顯色反應(yīng)，并測定其吸光度，填入表下中。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算待測液中草酸含量。波長（nm）508508508508菠菜待測液體積（mL）0.000.200.400.60吸光度五、注意事項：1．比色實驗的選擇：在顯色30min后進(jìn)行比較合適。2．在比色測定時，都是要以蒸餾水為參比溶液注意不能用1號溶液作為參比。3．加液時要按順序加入，分光光度計使用之前要預(yù)熱。4．用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測草酸含量時注意草酸的濃度要在限行范圍內(nèi)。5．要使吸光度控制在0.05至0.8，這樣才能提高準(zhǔn)確度。6．為了使草酸提取完全，應(yīng)將菠菜的榨汁在70—80℃下水浴加熱。組長:龔曉雪組員:郝哲語桂珍珍桂

7、亮